1 / 7

Lambda Zap

Lambda Zap. Cosmids. La sonde ‘a’ identifie les clones 1 et 2 Une sonde faite à partir de la séquence le plus 3’ du clone 2 va identifier les clones 3 et 4. Les sondes ( probes). Une sonde est une séquence d’ADN ou d’ARN qui peut hybrider avec une séquence complémentaire

kaida
Download Presentation

Lambda Zap

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Lambda Zap

  2. Cosmids

  3. La sonde ‘a’ identifie les clones 1 et 2Une sonde faite à partir de la séquence le plus 3’ du clone 2 va identifier les clones 3 et 4

  4. Les sondes ( probes) • Une sonde est une séquence d’ADN ou d’ARN qui peut hybrider avec une séquence complémentaire • Cible: 5’ AATTCGTATCGATCGTAGATTTACAT 3’ • Sonde: 3’ TTAAGCATAGCTAGCATCTAAATGTA 5’ • Il faut que l’ADN cible et la sonde soit dénaturer-simple brin-pour que la sonde puisse se fixer ( donc traitement avec la soude ou chauffé à 95°C pour l’ADN) • Fabrication des sondes d’ADN: • -Random priming • -Transcriptase Inverse • -Kinase

  5. Les sondes et l’hybridation Sondes radioactives: p32: B radiation-nucléotide avec le phosphate radioactif sur le alpha, beta ou gamma phosphate.

  6. Hybridation des acides nucléiques • Le stringence: Les conditions d’hybridation et en particulier la concentration de sel et le température. • Augmente la concentration de selréduire la stringence • Augmente la températureaugmente la stringence • Sonde souris+banque souris-utilise une stringence forte car les séquences sont identiques • Sonde souris+banque mouche-stringence moins forte car les séquences ont divergé pendant évolution. • Conditions souvent employées: 0,8M NaCl/citrate, 65°C • Formamide: en présence de formamide on réduit la température d’hybridation37°C . Le temps d’une hybridation est variable: souvent la nuit Il faut laver les filtres après l’hybridation: variable selon l’expérience

  7. Sondes froides • Digoxigenin: une stéroïde isolé des plantes • Liaison covalent avec un nucléotide: incorporé dans une sonde comme les nucléotides normales. • Détection avec des anticorps • Utilisé le plus souvent dans les sondes ARN

More Related