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22 ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy. ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES.

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Presentation Transcript

  1. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy ANALYSE DE L’EXPRESSION DE PROTEINES D’ADHESION D’OSTEOBLASTES ET DE FIBROBLASTES CULTIVES SUR DU NITI DE 2 RUGOSITES DIFFERENTES C. WIRTH, C. LAGNEAU, A.M. FREYRIA, D. DECORET, P. EXBRAYAT, M. LISSAC http://leibo.univ-lyon1.fr

  2. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Le contexte buccal Tissus Biofilm S. mutans Actinomyces Lactobacillus Cellules épithéliales Cellules fibroblastiques Cellules ostéoblastiques ??? ??? ??? Matériaux Matériaux métalliques Céramiques Polymères

  3. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Ra ≈ 0.07, ≈ 0.15 µm Matériaux implantaires : Ticp, Ti6Al4V, NiTi ? Dans notre étude, 2 états de surface  : NiTi poli-miroir (NiTi 2400) NiTi rugueux (NiTi 400) C. WIRTH, V. COMTE, C. LAGNEAU, P. EXBRAYAT, M.LISSAC, N. JAFFREZIC, L. PONSONNET. Nitinol surface roughness modulates in vitro cell response: a comparison between fibroblasts and osteoblasts. Materials Science and Engineering C 2005, 25 : 51-60.

  4. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Types cellulaires étudiés: • Cellules ostéoblastiques de calvaria de rat obtenues par digestion enzymatique • Cellules fibroblastiques de gencives humaines par technique des explants Techniques utilisées : immunomarquage biochimie (SDS-PAGE, Western Blot) biologie moléculaire (extraction ARN, RT-PCR)

  5. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy membrane cellulaire noyau cytosquelette complexe d’adhérence protéine adhésive de la MEC intégrines substrat Protéines étudiées : • collagène de type I • fibronectine • ostéocalcine • ostéopontine • ostéonectine Protéines adhésives de la MEC Protéines spécifiques des ostéoblastes

  6. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Pol Réaction d’amplification en chaîne = PCR Séquence cible : ADN à amplifier 5’ 3’ 3’ 5’ Taq Polymérase Amorces

  7. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy 5’ 3’ 3’ 5’ Premier cycle : 95°C : 45 s Étape 1 : DÉNATURATION

  8. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy 5’ 3’ 3’ 5’ : Tm : 1 min Étape 2 : HYBRIDATION

  9. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy 3’ 5’ Pol Pol : 72°C : 1 min Étape 3 : POLYMÉRISATION 5’ 3’

  10. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy 3’ 5’ Pol Pol : 72°C : 1 min Étape 3 : POLYMÉRISATION 5’ 3’

  11. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy 1er cycle 2ème cycle 3ème cycle 4ème cycle

  12. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Résultats des électrophorèses 400 2400 400 2400 400 2400 1000 pb ARN extraits de fibroblastes humains cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux 500 400 300 200 100 GAPDH(450pb) Collagène de type I(352pb) Fibronectine(442pb) 400 2400 400 2400 400 2400 1000 pb ARN extraits d’ostéoblastesde rat cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux 500 400 300 200 100 Collagène de type I(557pb) Fibronectine(351pb) GAPDH(393pb) Pas d’influence de la rugosité de surface sur la synthèse du collagène de type I et de la fibronectine par les ostéoblastes et les fibroblastes

  13. 22ème journée scientifique du Collège Français des Biomatériaux Dentaires – 26, 27 mai 2005 - Nancy Résultats des électrophorèses 400 2400 400 2400 400 2400 1000 pb ARN extraits d’ostéoblastesde rat cultivés sur du NiTi poli-miroir et rugueux 500 400 300 200 100 OP : ostéopontine ON : ostéonectine OC : ostéocalcine OP(688pb) ON(650pb) OC(760pb) Intensité de la bande plus importante sur le NiTi poli-miroir que le NiTi rugueux L’expression de l’ostéocalcine est favorisée par un état de surface poli-miroir

  14. Conclusion & Perspectives NiTi avec Ra=0.07µm  bon compromis pour obtenir un comportement optimum des ostéoblastes et des fibroblastes Étude de la synthèse d’autres protéines comme des intégrines, des cytoxines, des facteurs de croissance, des marqueurs d’apoptose par biologie moléculaire

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