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javier

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Presentation Transcript

  1. 17/09/2012 “Detección y genotipificación de norovirus GI/GII mediante Real Time (TaqMan®) Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), en muestras de heces de niños menores de 5 años de edad que presentaron episodios esporádicos de diarrea aguda en el cantón Quinindé, provincia de Esmeraldas – Ecuador”. Elizabeth Guambo C.

  2. Planteamiento del problema 15% 5% 70-80% (Blacklow & Greenberg, 1991) (Thomas & Lynch, 2007) • calicivirushumanos • NOROVIRUS (CDC, 2010) • Problema de salud pública 2 17/09/2012

  3. Justificación • EDA 3 17/09/2012

  4. Justificación Vía de transmisión (SEE, 2007) (CDC, 2010) • Incapacidad de aislar y cultivar in vitro • No existe un prototipo animal • NOROVIRUS • modelo experimental real de la patogenia en humanos (Ribes y Buesa, 2010) (Evans, et al., 2002) 4 17/09/2012

  5. Detectar y genotipificar norovirus GI/GII mediante Real Time (TaqMan®) Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction (RT-PCR), en muestras de heces de niños menores de cinco años de edad que presentaron episodios esporádicos de diarrea aguda en el cantón Quinindé, provincia de Esmeraldas – Ecuador. Objetivos Objetivo general 17/09/2012 5

  6. Estimar la prevalencia del síndrome diarreico agudo causado por norovirus GI/GII, en la población de estudio. Determinar la distribución estacional de la infección por norovirus GI/GII. Establecer los factores de riesgo (sociales, económicos y sanitarios) asociados a la expresión del potencial patogénico de norovirus GI/GII. Objetivos específicos 17/09/2012 6

  7. Familia caliciviridae [+]ssRNA (clase IV Baltimore) 5 géneros de virus personas Taxonomía calicivirus humanos • Género norovirus • 5 agrupaciones filogenéticas o genogrupos (GI hasta GV). (ICTV, 2010) (ICTV, 2010) 70 al 80% de los brotes de gastroenteritis no bacteriana en todo el mundo (Zheng, et al., 2000) (Zheng, et al., 2000) animales 7 17/09/2012

  8. Hospederos naturales Principal reservorio confirmado (Van derPoel, et al., 2000) 17/09/2012 8 8

  9. Mecanismos de transmisión Mantener una sucesión de los brotes (CDC, 2001) 17/09/2012 9 9

  10. Sintomatología clínica Otros (CDC, 2002) Periodo de incubación: 10 – 51 horas (24 h) (Gutiérrez y Ludert, s/a). • (Kaplan, et al., 1982). 17/09/2012 10 10

  11. No • enterotoxinas Patogénesis Schreiber, Blacklow & Trier, 1973) 17/09/2012 11

  12. Factores de riesgo >65 (Tregan, s/a) Grupo de riesgo (FUT2) (Patel, et al., 2008) < 5 • Genéticamente determinados "secretores" • HBGA "no-secretores" O: > • Fenotipo sanguíneo B: < < riesgo (Lindesmith, et al., 2003) (Tregan, s/a) 17/09/2012 12

  13. Diagnóstico de laboratorio • “gold standard” (Parashar, et al., 2001) 17/09/2012 13

  14. Tratamiento 17/09/2012 14

  15. El norovirus GII es el genotipo más frecuente relacionado con episodios esporádicos de diarrea aguda en niños menores de 5 años del cantón Quinindé, provincia de Esmeraldas – Ecuador. Sistema de hipótesis 17/09/2012 15

  16. Zona de estudio Trabajo de campo Trabajo de laboratorio Análisis clínico • 244 niños • Junio del 2009 y octubre del 2010 • (17 meses) Análisis molecular Perímetro urbano del cantón Quinindé (desde los recintos hasta la Marujita en la vía Santo Domingo de los Tsachilas hasta Cupa en la vía Esmeraldas) • “Formulario N” 17/09/2012 16

  17. Procedimientos • 48-72 horas • 9 días máximo • PBS • > 5g textura pastosa o semisolida • > 10mL liquidas 17/09/2012 17

  18. Real Time (TaqMan®) RT-PCR secuencia de cruce entre ORF1 y ORF2 Integrated DNA Technologies Primers/probes Primer/probemix[10µM] aR = A o G; B = C, G o T; Y = C o T; N = Cualquier nucleótido (Trujillo, et al., 2006) 17/09/2012 18

  19. MasterMix Real Time (TaqMan®) RT-PCR Condiciones de amplificación El volumen de reacción final se ajustó a 25μL, añadiendo 3μL de la muestra 17/09/2012 19 19 17/09/2012

  20. Diseño estadístico • Prevalencia • (Varela y Rial, 2008) Regresión logística • Factores de Riesgo (Taucher, 1997) (Díaz, 2006) Backward 17/09/2012 20

  21. Descripción general de la muestra

  22. Análisiscoproparasitológico Prevalencia:14,75% (36/244) Resultados y discusión Protozoariosintestinales Helmintos intestinales 17/09/2012 22

  23. Análisis molecular: norovirus Prevalencia: 29,5% (72/244) Resultados y discusión 16,76% 32% 29,5% 14.5% 17,4% 24% No se encontró ningún patrón estacional 17/09/2012 23

  24. Factores de riesgo Resultados y discusión 17/09/2012 24

  25. La prevalencia de parásitos intestinales en la población de estudio fue del 14,75%, de los cuales el 60,65% correspondió a protozoarios intestinales y el 39,34% a helmintos intestinales. El uso de la Real Time (TaqMan®) RT-PCR permitió estimar una prevalencia del 29,5% para el síndrome diarreico agudo causado por norovirus GI/GII, en niños menores de cinco años de edad del noroccidente del país. El genotipo de norovirus predominante fue el GII, siendo responsable del 73,61% del total de los casos positivos, seguidas por el Genotipo I con el 16,66% y el 9,72% restante se atribuyó a una infección mixta entre el Genotipo I y II. Conclusiones 17/09/2012 25

  26. No se observó ninguna diferencia estadísticamente significativa en el patrón estacional de la infección por norovirus, distribuyéndose de forma uniforme a lo largo de todo el año. Con respecto a la edad de la población se determinó que en la lactancia, el riesgo de padecer gastroenteritis aguda causada por norovirus se vio aumentado 1,23 veces. Entre los potenciales factores de riesgo relacionados con las condiciones socio-económicas del hogar se determinó que el acceso a una mejor calidad de vida incrementó el riesgo de padecer enfermedades diarreicas causadas por norovirus. Conclusiones 17/09/2012 26

  27. Conclusiones • La presencia de canes en el interior de la vivienda cumple un papel protector, mientras que la exposición o contacto de los menores con equinos eleva 3 veces la posibilidad de afectarse connorovirus.

  28. Debido a la alta prevalencia de norovirus encontrada en niños menores de cinco años de edad del noroccidente del país, se invita al ministerio de salud pública del Ecuador a profundizar el tema del impacto de los norovirus en la población infantil y los factores de riesgo involucrados con la afección que estos provocan, ampliando el presente estudio a escala nacional, con el fin de determinar la real prevalencia de norovirus en nuestro país. Es prudente un análisis de secuenciación molecular de las diferentes cepas de norovirus GI y GII identificados mediante Real Time (TaqMan®) RT-PCR, con el fin de homologar y comparar mediante un análisis filogenético las cepas circulantes en el Ecuador con las especies reportadas en la región y el mundo. Recomendaciones 17/09/2012 28

  29. Además, es necesario incluir en el presente, un análisis de norovirus en animales, así a través de una comparación de los patrones de similitud entre cepas de origen humano y cepas de origen animal, poder ayudar a esclarecer la posibilidad de un reservorio de calicivirus humanos en animales e incluso una potencial transmisión zoonótica. Es necesario evaluar la calidad del agua que es suministrada y consumida por la población del cantón Quinindé, a través de estudios que permitan identificar la presencia de patógenos entéricos, incluyendo virus. Recomendaciones 17/09/2012 29

  30. GRACIAS 17/09/2012 30