1 / 19

Monoklonális antitestek gyártása

Monoklonális antitestek gyártása. MAB-üzem elrendezési képe. Bioreaktorok. Emlős sejtek félfolytonos, vagy folytonos, sejtvisszatartásos fermentációja. Hígítási sebesség: 0,5-1,0 /nap Lassú, többhetes folyamat. MAB-előállítás folytonos fermentációval. Sejtek elválasztása.

howard-walton
Download Presentation

Monoklonális antitestek gyártása

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Monoklonális antitestek gyártása

  2. MAB-üzem elrendezési képe

  3. Bioreaktorok • Emlős sejtek félfolytonos, vagy folytonos, sejtvisszatartásos fermentációja. • Hígítási sebesség: 0,5-1,0 /nap • Lassú, többhetes folyamat.

  4. MAB-előállítás folytonos fermentációval

  5. Sejtek elválasztása • Az állati sejteket 0,65 μm pó-rusméretű mikroszűrővel vá-lasztják el. A szűrőlepény le-rakódásának megakadályo-zására a levet diaszűrőben cirkuláltatják (keresztáramú szűrés). Az oldott fehérjéket a sejtek közül sóoldattal (PBS = phosphate buffered saline, foszfáttal pufferolt só-oldat) mossák ki.

  6. Mikroszűrő membránok • Üregesszál (= „hollow fiber”) modulok.

  7. Affinkromatográfia • Az antitesteket olyan affinkro-matográfiás tölteten kötik meg, amelynek liganduma a Sta-phylococcus Protein A fehérjé-je. Ez az antitestek közös, Fc régiójához kapcsolódik, azaz minden antitestet megköt, más fehérjéket viszont nem.

  8. A MAB fehérjeszerkezete

  9. Protein A-affinkromatográfia • Előnyei: • Szelektíven köti az antitesteket • Nagy a kapacitása (15–30 g/liter töltet) • Hátrányai: • Drága: 8000–10 000 USD/liter (300 l-es oszlop esetén 10 000 USD/l-rel számolva egy töltet ára 3 millió $, amivel csak 15-20 tisztítási művelet végezhető el.) • Toxikus • Továbbjuthat, szennyezhet az elválasztás során • Az oszlop tisztítása nehézkes

  10. Ipari méretű kromatográfiás oszlop, d » h

  11. Ioncsere kromatográfia 1 • Erős kationcserélő gyantán. Cél: a főtermék megkötése, a szennyező anyagok kimosá-sa, azután a MAB elúciója. • Kiegyenlítő puffer: pH = 4,5 • Mosás: pH = 5,0 • pH-gradiens: pH 5,4→8,0 • A kolonna regenerálása: cc sóoldattal

  12. MAB kromatogramja kationcserélőn

  13. Ioncsere kromatográfia 2. • Tisztítás anioncserélő gyantán. • Cél: a szennyező anyagok meg-kötése, a főtermék kötődés nél-kül átmegy az oszlopon. • Kiegyenlítő puffer: pH = 7,0 • Elúció: pH= 7,0 (75 mM foszfát) • A kolonna regenerálása: sóol-dattal (0,5 M foszfát)

  14. Vírusok eltávolítása/inaktiválása

  15. A MAB-oldat koncentrálása ultraszűréssel • A fermentlé MAB-koncentráci-ója 100–150 mg/l. A végter-mékben 10-20 g/l-re van szük-ség, a koncentrálás legkímé-letesebbmódja az ultraszűrés. A MAB móltömege 180-190 kDa, ez alatti vágású memb-rán szükséges.

  16. Formulázás, szűrés • Hozzáadják a végső formu-lázáshoz szükséges anya-gokat: • Puffer: nem illékony, pl. PO4 • ionerősség beállítása: NaCl • Fagyvédő anyagok: pl. sza-haróz, mannit, glicerin • Töltőanyag: pl. glicin

  17. Egy kiszerelt MAB-készítmény összetétele

  18. A monoklonális antitestek piaca • Robbanásszerűen bővül. • Jelenleg ~100 MAB-készítmény van forgalomban, de ~500 van engedélyezés alatt az FDA-nál. • Előrejelzések szerint 2012-re az összes biológiai gyártású gyógyszer piacának felét a MAB-ok fogják kitenni (árbevé-telben kifejezve).

More Related