Tissue engineering coltura di cheratinociti e fibroblasti su supporto di plasma
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TISSUE ENGINEERING COLTURA DI CHERATINOCITI E FIBROBLASTI SU SUPPORTO DI PLASMA - PowerPoint PPT Presentation


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UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PARMA Facoltà di Scienze MM . FF . NN. Corso di Laurea Specialistica in Biologia ed Applicazioni Biomediche. TISSUE ENGINEERING COLTURA DI CHERATINOCITI E FIBROBLASTI SU SUPPORTO DI PLASMA. Relatori Chiar . ma Prof. ssa Renata Franchi Gazzola

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Presentation Transcript
Tissue engineering coltura di cheratinociti e fibroblasti su supporto di plasma

UNIVERSITA’ DEGLI STUDI DI PARMA

Facoltà di Scienze MM. FF. NN.

Corso di Laurea Specialistica in Biologia ed Applicazioni Biomediche

TISSUE ENGINEERINGCOLTURA DI CHERATINOCITI E FIBROBLASTI SU SUPPORTO DI PLASMA

Relatori

Chiar. ma Prof. ssa Renata Franchi Gazzola

Correlatori

Chiar. mo Dott. Stefano Negri

Laureanda

Elena Alessi

Anno Accademico 2007/2008


Tissue engineering
TISSUE ENGINEERING

Area multidisciplinare di ricerca che ha come scopo la

rigenerazione di tessuti ed organi danneggiati del nostro

organismo

PRINCIPI

Prelevare le cellule staminali del Paziente

Far crescere e differenziare le cellule su un supporto biologico

Sottoporre il Paziente al trapianto


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BIOMATERIALI

devono possedere le seguenti caratteristiche:

  • tollerabilità: devono essere immunologicamente

    inerti (biocompatibili)

  • impalcatura provvisoria: dopo integrazione il

    biomateriale deve essere sostituito dal tessuto

    originario (biodegradabili)

  • contenuto informativo: devono comunicare e

    scambiare segnali con le cellule ospite


Le matrici piu idonee
LE MATRICI PIU’ IDONEE..

Per la crescita e differenziazione di cheratinociti e fibroblasti

autologhi, le matrici più idonee, sono di tipo naturale e si

suddividono in:

- collagene

- agarosio

- acido ialuronico

- colla di fibrina

- cellulosa

Grande interesse è rivolto verso l’utilizzo del plasma umano

come supporto di crescita per cheratinociti e fibroblasti


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SCOPO TESI

Isolare cheratinociti e fibroblasti umani,

utilizzando il plasma autologo per

formare lembi di cute con caratteristiche

morfo-funzionali e immunoistochimiche

simili all’epidermide normale


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CASO CLINICO

V. P. di anni 65, affetta da ulcera vascolare venosa circonferenziale alla gamba sinistra.


Materiali e metodi
MATERIALI E METODI

  • Estrazione e amplificazione di cheratinociti e fibroblasti umani autologhi, prelevati da un’unica biopsia

  • Preparazione del supporto di plasma

  • Aggiunta di fibroblasti e cheratinociti a diverse densità


Preparazione supporto di plasma
PREPARAZIONE SUPPORTO DI PLASMA

ACIDO TRANEXAMICO

PLASMA

SOLUZIONE FISIOLOGICA

CLORURO DI CALCIO

+

FIBROBLASTI

+

CHERATINOCITI

30’, 37°C, 5% CO2



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DENSITA’ DI SEMINA

5X104/cm2

FU

5X104/cm2

KE

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FU

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KE

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FU

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KE

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FU

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KE

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FU

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KE

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FU

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KE

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FU

5X104/cm2

KE

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FU

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KE

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FU

15X104/cm2

KE


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MODALITA’ DI SEMINA


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PRELIEVO

4 giorni

8 giorni

13 giorni

  • i frammenti di cute artificiale sono stati prelevati per:

  • Valutazione della consistenza ottimale

  • Valutazione della densità cellulare ottimale

  • Colorazioni istochimiche ed immunoistochimiche


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COLTURA PRIMARIA

cheratinociti

fibroblasti 3T3

microscopio a contrasto di fase dopo 8 giorni (400X)


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COLTURA SECONDARIA

cheratinociti

cheratinociti

fibroblasti

cheratinociti

cheratinociti

cheratinociti

microscopio a contrasto di fase dopo 12 giorni (400X)


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FIBROBLASTI

Derma

Fibroblasti

microscopio a contrasto di fase (400X)


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FIBROBLASTI

microscopio a contrasto di fase (400X)


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FIBROBLASTI ALL’INTERNO DEL SUPPORTO DI PLASMA

microscopio a contrasto di fase dopo 3 giorni (200X)


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fibroblasti

cheratinociti

microscopio a contrasto di fase dopo 4 giorni (200X)


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FRAMMENTO DI CUTE ARTIFICIALE

Ematossilina-Eosina (400X)


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FIBROBLASTI

Ematossilina-Eosina (400X)


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CHERATINOCITI

Ematossilina-Eosina (400X)


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FIBROBLASTI

immunoistochimica: vimentina (400X)


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CHERATINOCITI

immunoistochimica: citocheratina AE1 (400X)


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MEMBRANA BASALE

immunoistochimica: collageno IV




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INNESTO DEL LEMBO DI CUTE ARTIFICIALE

prima...


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INNESTO DEL LEMBO DI CUTE ARTIFICIALE

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