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BIOTECHNOFARM: LA LLAVOR DELS BIOTECNÒLEGS DEL FUTUR. SEGONA SESSIÒ. NORMAS DE SEGURIDAD. MUCHO CUIDADO. - Pelo largo recogido, cuidado con anillos y relojes NO TOCAR los instrumentos cuando estén funcionando (cubeta, transiluminador…)
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BIOTECHNOFARM: LA LLAVOR DELS BIOTECNÒLEGS DEL FUTUR SEGONA SESSIÒ
MUCHO CUIDADO • - Pelo largo recogido, cuidado con anillos y relojes • NO TOCAR los instrumentos cuando estén funcionando (cubeta, transiluminador…) • Trabajar siempre con cuidado, son materiales peligrosos o frágiles si no se usan bien (¡además de muy caros!) • Lavarse bien las manos al terminar
2ª SESIÓN • Distribución de grupos • - Parejas para experimento 1 • - Grupos de 4 personas para experimento 2 • Experimento 1 – Extracción de ADN de Vegetales • Experimento 2 – Diagnóstico Genético Forense • Debate sobre Temas de Controversia
EXPERIMENTO 2EXPOSICIÓN DE LOS HECHOS • Una viuda muy influyente ha conseguido reabrir el caso del asesinato de su marido hace 25 años. En aquel momento las pruebas no fueron concluyentes pero ella siempre sospechó que había sido el socio de su marido, ya que con la muerte de éste consiguió aumentar su participación en la empresa. La policía investigó a cuatro sospechosos: • Laura G. C. Mujer. 0-. La mujer de la víctima. Heredó el 50% de sus bienes, entre ellos la mansión en la que ambos vivían. • Francisco P.M. Hombre.0-. El socio de la víctima. Heredó el 30% de sus bienes, entre ellos un aumento del 40% en sus acciones de la empresa, pasando a tener el 51% y por tanto siendo el socio mayoritario. • Concha L. J. Mujer. 0-. La amante del fallecido durante sus últimos 5 años de vida. Dijo que el muerto le había prometido en numerosas ocasiones que iba a dejar a su mujer para casarse con ella, cosa que evidentemente nunca hizo. • Manuel B. S. Hombre. 0-. El amante de la mujer del fallecido y su actual marido. No quería que su actual mujer se divorciase del fallecido porque tenían un acuerdo prematrimonial que no le dejaba nada en caso de infidelidad de ésta.
EXPERIMENTO 2 SOSPECHOSOS VIUDA-S1 NUEVO MARIDO-S4 SOCIO-S2 AMANTE-S3
Saliva, pelo, epiteliales… ADN EXPERIMENTO 2 INTRODUCCIÓN ADN ADN PCR • El material genético del culpable, hallado en la escena del crimen, se lleva a un laboratorio para amplificarlo y tener más cantidad de ADN: ADN ADN EXTRACCIÓN ADN PCR: polymerase chain reaction.Obtenemos muchas copias de un fragmento determinado de ADN. FRAGMENTO DE ADN AMPLIFICADO
EXPERIMENTO 2 INTRODUCCIÓN • En el ADN hay zonas que se repiten y, dependiendo de la persona, habrá unas repeticiones u otras: • ... GTTCAACCATCCATCCATGGCCAT... 3 REPETICIONES • ... GTTCAACCATCCATCCATCCATGGCCAT... 4 REPETICIONES • ... GTTCAACCATCCATCCATCCATCCATGGCCAT... 5 REPETICIONES • ... GTTCAACCATCCATCCATCCATCCATCCATGGCCAT... 6 REPETICIONES • Si amplificamos las zonas con repeticiones, tendremos • diferentes tamaños de ADN amplificado dependiendo • de la persona. El tamaño del ADN puede verse en un • gel de AGAROSA. • Otra diferencia en el ADN es la existencia o no de sitios donde cortan determinadas enzimas; la enzima puede reconocer el fragmento y cortarlo o no. Si la enzima corta, tendremos dos fragmentos y si no corta sólo tendremos uno.
EXPERIMENTO 2 INTRODUCCIÓN • Como tenemos que saber el tamaño de los fragmentos de ADN de nuestro tubo de ensayo y saber si hay uno o dos, pondremos las muestras en un gel de agarosa y las separaremos mediante la técnica de • ELECTROFORESIS: separación de moléculas dependiendo de su movilidad en un campo eléctrico. • El ADN tiene carga negativa (grupos fosfato) por lo que irá hacia el polo positivo. Al pasar a través del gel de agarosa, los fragmentos más grandes se irán quedando retenidos en los poros del gel y migrarán más despacio, separándose de fragmentos más pequeños. ELECTROFORESIS GEL DE AGAROSA
EXPERIMENTO 2PROTOCOLO GEL TRANSILUMINADOR 30 min CUBETA ADN
EXPERIMENTO 1EXTRACCIÓN DE ADN DE PLÁTANO Musa acuminata
EXPERIMENTO 1EXTRACCIÓN DE ADN SAL TRITURAR AGUA LISIS FILTRO ALCOHOL
EXPERIMENTO 1PROTOCOLO • Poner el tubo de isopropanol en hielo (tapón blanco). • 2. Pesar 1 g de plátano, equivale a media rodaja de 3 mm de espesor. • 3. Añadir la solución salina (1,5 ml, tapón rojo) y triturar con la varilla de vidrio para permeabilizar la pared celular y precipitar las proteínas. • 4. Añadir la solución de lisis (3 ml, tapón azul). Contiene detergente que emulsiona los lípidos de la membrana celular y la rompe. • 5. Homogeneizar con la varilla de vidrio. Dejar reposar en la mesa unos 15 minutos, triturando cada 5 minutos, para que el detergente actúe. • 6. Pasar toda la mezcla por el filtro colocado en el embudo sobre el tubo con tapón verde. Cuando ya no caigan más gotas, apretar el filtro con los dedos para recuperar al menos 3 ml. • 7. Añadir el isopropanol (2 ml) frío y agitar suavemente, hasta que se forme el ovillo de ADN.
EXPERIMENTO 1 PREGUNTAS • - ¿Nos ha salido bien la práctica en todos los grupos? ¿Es normal? • - ¿Se forman burbujitas en el ADN? Si ocurre, ¿por qué? • - ¿Podríamos ingerir el precipitado de ADN que hemos extraído? • - ¿Para qué puede servir este tipo de técnicas? • - ¿Se usarán los mismos materiales en laboratorios de investigación? • - ¿Veríamos algo si ponemos el precipitado al microscopio? • - ¿Qué más se os ocurre preguntar?
EXPERIMENTO 2 RESULTADOS • - ¿Nos han salido todas las bandas en su sitio? • - ¿Por qué podría ser? • - ¿Se nos han torcido las columnas de migración? • - ¿Quién es el asesino? ¿Cómo lo sabemos? • - ¿Cómo se aplica este método en casos policiales reales? • - ¿Para qué otras cosas se podría utilizar esta técnica? • - ¿Es recomendable utilizar marcajes alternativos al BrEt? • - ¿Qué más se os ocurre preguntar?
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MATERIAL HUMANO Eugenesia Fecundación in vitro Embriones Humanos Células Madre
EXPERIMENTACIÓN CON ANIMALES Muy regulado por Comisiones de Ética
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