1 / 24

Predikce odpovědi na terapii nízkomolekulárními inhibitory EGFR1 u karcinomu plic

Predikce odpovědi na terapii nízkomolekulárními inhibitory EGFR1 u karcinomu plic. J. Berkovcová, M. Dziechciarková, R. Trojanec, A. Janošťáková, I. Grygárková, V. Kolek, M. Hajdúch Laboratoř experimentální medicíny www.lem-olomouc.cz. Plicní nádory nejčastější nádorové onemocnění

erno
Download Presentation

Predikce odpovědi na terapii nízkomolekulárními inhibitory EGFR1 u karcinomu plic

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Predikce odpovědi na terapii nízkomolekulárními inhibitory EGFR1 u karcinomu plic J. Berkovcová, M. Dziechciarková, R. Trojanec, A. Janošťáková, I. Grygárková, V. Kolek, M. Hajdúch Laboratoř experimentální medicíny www.lem-olomouc.cz

  2. Plicní nádory • nejčastější nádorové onemocnění • na 1.místě v příčinách úmrtí • více jak 50% diagnostikováno v pokročilém stádiu … medián přežití 9-10 měsíců • Nemalobuněčný plicní karcinom (NSCLC)  70-75% bronchogenních karcinomů

  3. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Overexprese Egfr1 u nádorů • Head & neck 80-100% • Renal cell 50-90% • NSCLC 40-80% • Glioma 40-50% • Ovarian 35-70% • Pancreatic 30-50% • Colorectal 25-77% • Breast 14-91% • Gastric 40%

  4. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Signální transdukce Egfr1 • Signální dráha AKT a STAT  přežívání buněk • Signální dráha MAPK  proliferace buněk

  5. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Terapeutické působení na Egfr1 • Vysokomolekulární inhibitory • protilátky zaměřené na extracelulární část • Nízkomolekulární inhibitory • preparáty zaměřené na intracelulární část … nízkomolekulární látky pronikající buněčnou membránou … inhibují fosforylaci receptoru  zastavení patologicky aktivované signální dráhy

  6. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Nízkomolekulární inhibitory tyrozinkináz Arora et Scholar, 2005

  7. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Patologická aktivace Egfr1 • Amplifikace genu egfr1 • Overexprese genu egfr1 • Aktivující mutace tyrozinkinázové domény • vyšetřováno v LEM (prospektivně u pacientů s plánovanou terapií Tarcevou)

  8. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Amplifikace a exprese genu egfr1 • Metoda FISH: • sonda egfr1 genu • sonda CEP 7 • Metoda IHC: • myší monoklonální protilátka anti-humane Egfr1 (DakoCytomation)

  9. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Aktivující mutace • Přítomné v tyrozinkinázové části receptoru • Bodové mutace  záměna aminokyselin • Delece (spojené s inzercí) bez posunutí čtecího rámce

  10. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Vyšetření mutací v LEM Metoda přímého sekvenování exonu 19 a 21: • laserová mikrodisekce nádorových buněk (mikrodisektor Arcturus) • izolace DNA • dvoukolová amplifikace exonu 19 a 21 • přečištění DNA před sekvenací • sekvenační reakce • čtení sekvence na genetickém analyzátoru (Beckman Coulter)

  11. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Zpracování materiálu - zamražená nádorová tkáň - parafinové bločky - cytologické preparáty tkáň před disekcí selekce buněk k disekci tkáň po disekci uchycení buněk na víčku natrávení buněk proteinázou K uvolnění DNA do roztoku

  12. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Amplifikace DNA (Lynch et al. 2004; Marchetti et al. 2005)

  13. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Přímá sekvenace Záznam analyzovaného chromatografu z automatického sekvenátoru – příklad mutace L858R v exonu 21: záměna … T > G  Leu > Arg

  14. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Úskalí sekvenace DNA po mikrodisekci aberantní nukleotid (T) DNA z celkové tkáně wt nukleotid (A)

  15. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Fragmentační analýza 158bp  del 747-753 ins S • vyšetření delecí exonu 19 • detekce délkového polymorfismu zachycena delece exonu 19 pacient bez delece exonu 19 176bp pacient bez delece exonu 19

  16. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Rezistence k inhibitorům • odpověď na léčbu u < 10% pacientů s NSCLC • Jeden z důvodů • mutace v genu k-ras (v dalších členech signální dráhy?) • Velikost 21 kDa • GTP-vázající protein • Tvorba různých isoforem v tkáních • Součást transdukční kaskády • Účastní se přenosu signálu

  17. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Mutace ve 12 a 13 kodonu

  18. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Detekce mutací genů egfr1 a k-ras u pacientů s NSCLC – retrospektivní studie

  19. Výsledky všech vyšetření statutu genů egfr1 a k-ras u pacientů s NSCLC – retrospektivní studie

  20. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Detekce mutací genů egfr1 a k-ras u pacientů s HNSCC – retrospektivní studie

  21. Výsledky všech vyšetření statutu genů egfr1 a k-ras u pacientů s HNSCC – retrospektivní studie

  22. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Výsledky vyšetření statutu genů egfr1 a k-ras u pacientů s NSCLC – prospektivní studie

  23. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Správné prediktivní vyšetření • Klinické: - kouření - adenokarcinomy - pohlaví - asijský původ • Laboratorní: - amplifikace egfr1 - overexprese egfr1 - mutace tyrozinkinázové domény egfr1 - mutace k-ras

  24. LABORATORY OF EXPERIMENTAL MEDICINE Podporováno: firmou Astra-Zeneca granty: MSM6198959216 IGA MZCRNC7506-3 NC7495 Autoři: Jitka Berkovcová Marta Dziechciarková Radek Trojanec Anna Janošťáková Ivona Grygárková Vítězslav Kolek Marián Hajdúch Děkuji za pozornost

More Related