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Détection Antigène/anticorps

BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia. Détection Antigène/anticorps. Projet de biologie Moléculaire. 15/04/2011. Objective. Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment.

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Détection Antigène/anticorps

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Presentation Transcript

  1. BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia Détection Antigène/anticorps Projet de biologie Moléculaire 15/04/2011

  2. Objective • Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment. • Get a refraction index that indicates the bonding between the antibody in the surface and the peptides present. • Follow the interaction between an immobilized peptide and an antibody in solution by using a surface Plasmonic Resonance.

  3. Surface Plasmon Resonance • Mesure de l’angle de résonance du prisme • L’angle de résonance est due à l’apparition d’une onde évanescente (plasmon) I0 I/I0 Angle I Angle Angle de résonance Or Prisme

  4. Surface Plasmon Resonance • Les plasmons sont sensibles à la masse des éléments à la surface de la couche métallique • Ainsi l’angle de résonance change en fonction de la masse “accrochée” à l’or

  5. Protocole expérimental • Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme • Etape 2 : Dépôt des peptides • Etape 3 : Vérification de l’homogénéité • Etape 4 : SPR

  6. Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme Prisme d’or simple • Nettoyage du prisme au plasma • Bain dans l’aminothiol • Lavage Prisme d’or fonctionnalisé

  7. Etape 2 : Dépôt des peptides • Peptides : • Peptide K-linker-c-myc : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSEQKLISEEDL - COOH • Peptide K-linker-Flag : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSDYKDDDDK – COOH • Peptide K-linker-His : NH2 - KGGSGGSYGGSGGSHHHHHH – COOH • Dépôt au robot • Blocage du prisme à l’éthanolamine

  8. Etape 3 : Vérification de l’homogénéité • Suivi par mesure de la tension de surface • Après chaque étape : mesure de l’angle de goutte • Utilisation d’un goniomètre • Suivi par marquage au SYPRO orange • Protocole à détailler

  9. Etape 4 : SPR • Initialisation de l’appareil • Mesure de l’angle de résonance • Passage des tampons avec les différents anticorps • Obtention de courbe de réflexitivé en fonction de l’angle • Mode pour déterminer la cinétique. • Mode pour déterminer la concentration en anticorps.

  10. Gestion du projet/ Gant Chart

  11. Merci de votre écoute

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