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Détection Antigène/anticorps

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BOISSONNAT Guillaume CASTILLO Dinorah GRABOT Laetitia. Détection Antigène/anticorps. Projet de biologie Moléculaire. 15/04/2011. Objective. Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment.

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Presentation Transcript
d tection antig ne anticorps

BOISSONNAT Guillaume

CASTILLO Dinorah

GRABOT Laetitia

Détection Antigène/anticorps

Projet de biologie Moléculaire

15/04/2011

objective
Objective
  • Determine the interaction antibody-antigen by calculating affinity, using a real-time measure equipment.
  • Get a refraction index that indicates the bonding between the antibody in the surface and the peptides present.
  • Follow the interaction between an immobilized peptide and an antibody in solution by using a surface Plasmonic Resonance.
s urface plasmon resonance
Surface Plasmon Resonance
  • Mesure de l’angle de résonance du prisme
  • L’angle de résonance est due à l’apparition d’une onde évanescente (plasmon)

I0

I/I0

Angle

I

Angle

Angle de résonance

Or

Prisme

s urface plasmon resonance1
Surface Plasmon Resonance
  • Les plasmons sont sensibles à la masse des éléments à la surface de la couche métallique
  • Ainsi l’angle de résonance change en fonction de la masse “accrochée” à l’or
protocole exp rimental
Protocole expérimental
  • Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme
  • Etape 2 : Dépôt des peptides
  • Etape 3 : Vérification de l’homogénéité
  • Etape 4 : SPR
etape 1 fonctionnalisation du prisme
Etape 1 : Fonctionnalisation du prisme

Prisme d’or simple

  • Nettoyage du prisme

au plasma

  • Bain dans l’aminothiol
  • Lavage

Prisme d’or fonctionnalisé

etape 2 d p t des peptides
Etape 2 : Dépôt des peptides
  • Peptides :
    • Peptide K-linker-c-myc :

NH2 - KGGSGGSYGGSGGSEQKLISEEDL - COOH

    • Peptide K-linker-Flag :

NH2 - KGGSGGSYGGSGGSDYKDDDDK – COOH

    • Peptide K-linker-His :

NH2 - KGGSGGSYGGSGGSHHHHHH – COOH

  • Dépôt au robot
  • Blocage du prisme à

l’éthanolamine

etape 3 v rification de l homog n it
Etape 3 : Vérification de l’homogénéité
  • Suivi par mesure de la tension de surface
    • Après chaque étape : mesure de l’angle de goutte
    • Utilisation d’un goniomètre
  • Suivi par marquage au SYPRO orange
    • Protocole à détailler
etape 4 spr
Etape 4 : SPR
  • Initialisation de l’appareil
  • Mesure de l’angle de résonance
  • Passage des tampons avec les différents anticorps
  • Obtention de courbe de réflexitivé en fonction de l’angle
    • Mode pour déterminer la cinétique.
    • Mode pour déterminer la concentration en anticorps.