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Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis

Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis. contenido. • Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2) • Propiedades f ísicas: - absorción luz UV - desnaturalización - reasociación

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Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis

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  1. Tema 3. Propiedades de los ácidos nucleicos Métodos de análisis

  2. contenido • Propiedades químicas: vistas en estructura (tema 2) • Propiedades físicas: - absorción luz UV - desnaturalización - reasociación - viscosidad • Caracterización: - efecto hipercrómico - curvas Cot - secuenciación (tema 29) • Aislamiento y caracterización: - centrifugación - electroforesis • Detección: - marcaje radiactivo - hibridación: tipos, FISH, chip, Southern - amplificación (PCR - tema 29)

  3. UV Absorción de luz ultravioleta (UV)

  4. desnaturalización y reasociación

  5. viscosidad • Viscosidad del DNA en solución • disminuye al • fragmentarse: • agitación mecánica, sonicación (ultrasonido) • desnaturalizarse: • calor, baja fuerza iónica, pH alcalino, urea, …

  6. efecto hipercrómico

  7. efecto hipercrómico por desnaturalización del DNA

  8. cinética de reasociación

  9. Curvas Cot

  10. Cot1/2 = 1/k Cot1/2 puro = f Cot1/2 mezcla X R = f N 1/2 = 1/(1 + k Cot ) 1/2 X = a Cot 1/2

  11. genoma nuclear humano

  12. no todo el DNA codifica proteínas Britten y Kohne, 60’s

  13. centrifugación rotores y centrífugas

  14. centrifugación diferencial

  15. centrifugación zonal gradiente de sacarosa separación por tamaño

  16. centrifugación isopícnica gradiente de CsCl separación por densidad

  17. SeparaciónDNA2c y DNAss 1. centrifugación isopícnica 2. tratamiento con nucleasas específicas de DNA2c o DNAss 3. columnas de hidroxiapatito: retienen DNA2c y pasa el DNAss (el DNA2c puede ser eluido aumentando la temperatura o la concentración salina) 4: filtros de nitrocelulosa: unen DNAss y no DNA2c

  18. electroforesis

  19. marcaje radiactivo radio

  20. isótopos pesados - isótopos más usados en biología: N14 y N15; C12 y C13 - uso en centrifugación isopícnica

  21. hibridaciónmolecular

  22. hibridación DNA/RNA

  23. hibridación en filtro

  24. hibridación en colonia

  25. FISH

  26. FISH centrómeros telómeros

  27. cariotipo espectral humano

  28. chips de DNA

  29. microarrays

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