Comparable between Rapid One Step Immunochromatographic Assay and ELISA

1. Comparable between Rapid One Step • Immunochromatographic Assay and ELISA • in the Detection of Prostate Specific Antigen • in Vaginal Specimens of Raped Women • Vichan Peonim MD*, • J Med Assoc Thai 2007; 90 (12): 2624-9

2. วัตถุประสงค์ (objective)

3. เพื่อพิสูจน์เปรียบเทียบคุณภาพความแม่นยำเพื่อพิสูจน์เปรียบเทียบคุณภาพความแม่นยำ - rapid one step test kit - ELISA • สรุปสิ่งที่เป็นประโยชน์ของวิธีการตรวจเพื่อที่ให้เหมาะสมในการ นำมาใช้อย่างกว้างขวางในงานบริการประจำ

4. ความสำคัญ • ขาดประจักษ์พยานที่พบเห็นผู้กระทำผิด • การพิสูจน์หลักฐานทางชีววิทยาในทางนิติวิทยาศาสตร์ • ใช้สืบหาผู้กระทำความผิด

5. การพิสูจน์หลักฐานทางชีววิทยาในทางนิติวิทยาศาสตร์การพิสูจน์หลักฐานทางชีววิทยาในทางนิติวิทยาศาสตร์ • ในช่องคลอดของผู้เสียหาย (Vaginal Specimens of Raped Women) • ตัวอสุจิ (sperm) จากกล้องจุลทรรศน์ • น้ำอสุจิ (semen) • สารชีวเคมีที่เป็นส่วนประกอบใน semen

6. ปัญหาและที่มา • การตรวจหาเอนไซม์ Acid phosphatase test • ทดสอบยืนยันผลด้วยวิธีการตรวจหา PSA (prostate specific antigen) • การวิเคราะห์ PSA เป็นแบบ quantitative ด้วยวิธีการวิเคราะห์ของ ELISA • Rapid one step test kit (semi-quantitative) ยังไม่นิยมใช้ในงานประจำ

7. เปรียบเทียบการใช้งาน

8. ทบทวนวรรณกรรม

9. PSA • E1 , P30 • สารจำพวก glycoprotein ที่ผลิตจากต่อม prostatic • ยีนของ PSA อยู่บน chromosome 19 • โดยปกตินั้น PSA ใช้เป็นตัวบ่งชี้มะเร็งต่อมลูกหมาก

10. ภาพแสดงอวัยวะเพศชาย

11. Spermatozoa • โครงสร้างหลัก ได้แก่ ส่วนหัวและส่วนหาง • จากนั้นก็แบ่งตัวแบบ meiosis

12. ตัวอสุจิ(ดูสด)ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ตัวอสุจิ(ดูสด)ภายใต้กล้องจุลทรรศน์ ตัวอสุจิ(ย้อมสี)ภายใต้กล้องจุลทรรศน์

13. ตัวอสุจิที่ผิดปกติ

14. ส่วนที่เป็นเซลล์ คือ ตัวอสุจิ (spermatozoa) ส่วนที่เป็นของเหลว คือ พลาสมา (seminal plasma) semen

15. semen • ใน 1 ลูกบาศก์เซนติเมตร มีตัวอสุจิประมาณ 20-200 ล้านตัว • ปริมาณของน้ำอสุจิที่หลั่งแต่ละครั้งประมาณ 3-5 ลูกบาศก์เซนติเมตร • Seminal vasicle ประมาณ 70% • Prostate gland ประมาณ13-33%

16. ELISA • แอนติเจนหรือแอนติบอดีเกาะอยู่บน solid phase • แต่ละขั้นตอนจะต้องมีการแยกเอาสารส่วนเกินที่ไม่ได้ทำปฏิกิริยาออกไป • วิธีที่มีความไวและความจำเพาะสูง

17. เอนไซม์ที่นิยมใช้ในวิธีการ ELISA คือ • Horseradish peroxidase • (substate ที่นิยม คือ O-phenylene diamine ให้สีน้ำตาล) • alkaline phosphatase • (substrate ที่นิยมคือ p-nitrophenyl phosphate ให้สีเหลือง) • Cut off 0.5 ng/ml

19. Rapid one step test kit (Immunochromatography) • ตัวกลางยึดเกาะ (solid phase) • กระดาษชนิด nitrocellulose หรือ nylon • เมื่อทำปฏิกิริยา ตกตะกอนลงมาเกาะบนผิวกระดาษ ปรากฏสีสำหรับการอ่านผล • ทำให้เกิดสี เช่น ผงทอง (colloidal gold)

20. Rapid one step test kit (Immunochromatography) • การวิเคราะห์ PSA ของ rapid one step test kit • test (mouse anti-human PSA Mc antibody) • Antibody colloidal gold conjugate • สิ่งส่งตรวจพบ PSA (specific antibody- PSA-color conjugate) • การตรวจวิเคราะห์แบบนี้ใช้สารตัวอย่าง 100 µl ( 3 หยด) • cut off ของ PSA คือ 4 ng/ml

21. Rapid one step test kit (Immunochromatography)

22. ขั้นตอนการตรวจ • การตรวจร่างกายผู้เสียหาย • การตรวจร่างกายผู้ต้องหา • การตรวจทางห้องปฏิบัติการ • วัตถุพยานที่พบ • การตรวจหาเอนไซม์ Acid phosphatase • การดูคราบอสุจิด้วยเครื่องกำเนิดแสง • การตรวจ PSA (prostate specific antigen) • การตรวจยืนยันด้วยกล้องจุลทรรศน์

24. วิธีการทดลอง (material-method)

25. วิธีการทดลอง (material-method) • พยาธิวิทยา คณะแพทย์ศาสตร์ โรงพยาบาลรามาธิบดี มหาวิทาลัยมหิดล • สิ่งส่งตรวจจำนวน 100 ตัวอย่าง ได้จากสูตร • N = ที่ระดับความเชื่อมั่น 96% • ; = 0.05 หรือ 1-α/2 (alpha error two-tailed) • Z = Z0.975 = 1.96

26. วิธีการทดลอง (material-method) • N = 59 ที่ระดับความเชื่อมั่น 96% • จากงานวิจัยอื่นตรวจพบ = 67.5% • ต้องมีตัวอย่าง อย่างน้อย = 87 ตัวอย่าง

27. วิธีการทดลอง (material-method) - Cotton swab - กระดาษกรองที่มีพื้นที่ 0.3 x 0.3 cm - ใส่ในหลอดทดลองที่มีน้ำกลั่น (DW) 2 ml ปั่นเหวี่ยง 3 นาที - นำไปทดสอบด้วย rapid one step test kit และ ELISA

28. วิธีการทดลอง (material-method) • ทั้ง 2 หลักการ • ตรวจสอบหาตัวอสุจิโดยการดูภายใต้กล้องจุลทรรศน์ (gold standard) • เปรียบเทียบ sensitivity, accuracy,specificity, positive predictive value, negative predictive value

29. ผลการทดลอง (result)

30. Result TP FP FN TN

31. Result

32. วิจารณ์ผลการทดลอง (discussion)

33. วิจารณ์ผลการทดลอง (discussion) • ในประเทศที่พัฒนาแล้วใช้วิธีการทดสอบแบบ rapid one step test kit เพื่อการตรวจแยกใน seminal fluid • ผลการทดลองของวิธีทั้งสองนั้นเมื่อเปรียบเทียบแล้วไม่มีความแตกต่างกันยกเว้น • sensitivity • negative predictive value • ค่าจากการคำนวณของ rapid kit ดีกว่า ELISA

34. สรุป (conclusion)

35. สรุป • rapid one step test kit นำมาใช้การตรวจ PSA ในช่องคลอดในคดีข่มขืนกระทำชำเราที่ทำในงานประจำได้อย่างเหมาะสม

36. อาจารย์ที่ปรึกษา อ.ธงชัย เตโชวิศาล thank you