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第三章 兔血清效价检测 ( ELISA ) PowerPoint Presentation
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第三章 兔血清效价检测 ( ELISA )

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第三章 兔血清效价检测 ( ELISA ) - PowerPoint PPT Presentation


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第三章 兔血清效价检测 ( ELISA ). 一、实验目的 了解酶联免疫吸附试验( Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA )的原理及优点,学习 ELISA 的操作过程。. 二、原理 抗原-抗体反应的特异性 酶促反应的高效性. 二、原理 酶标记抗体(或抗原)与固相载体上的相应抗原(或抗体)结合后,加入底物,酶催化底物出现颜色反应,颜色的深浅与抗原(或抗体)的量相关,用酶标仪测定其吸光值进行定量分析。. 二、原理(间接 ELISA 检测抗体). A. B. E. C. D.

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Presentation Transcript
enzyme linked immunosorbent assay elisa elisa

一、实验目的了解酶联免疫吸附试验(Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)的原理及优点,学习ELISA的操作过程。

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二、原理 酶标记抗体(或抗原)与固相载体上的相应抗原(或抗体)结合后,加入底物,酶催化底物出现颜色反应,颜色的深浅与抗原(或抗体)的量相关,用酶标仪测定其吸光值进行定量分析。

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二、原理(间接ELISA检测抗体)

A

B

E

C

D

A:包被抗原;B:加待检血清;C:加酶标二抗;D:加底物、显色;E:终止、读数

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二、原理ELISA技术具有特异、敏感、结果判断客观、简便和安全等优点,在生物学及相关学科中应用广泛。二、原理ELISA技术具有特异、敏感、结果判断客观、简便和安全等优点,在生物学及相关学科中应用广泛。

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二、原理 本次实验以APP分泌到细胞外的天然毒素ApxIIA为检测抗原,包被酶标板,通过间接ELISA方法检测兔血清中针对APP毒素的抗体。

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三、材料5.二级抗体:HRP标记的羊抗兔IgG;6.显色液:TMB显色试剂(ELISA用)7.终止液:1%SDS三、材料5.二级抗体:HRP标记的羊抗兔IgG;6.显色液:TMB显色试剂(ELISA用)7.终止液:1%SDS

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四、操作步骤1.加稀释液 在酶标板第1管加190µl洗涤液,2~11孔加100µl洗涤液,12孔加97.5µl洗涤液。

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四、操作步骤2.稀释血清 在第一孔加待检血清10µl,混匀后取100µl到第二孔,依次稀释到第10孔,弃取100µl。 第11孔为空白,不加血清,第12孔加空白血清2.5µl,混匀。

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四、操作步骤3.温浴 稀释完成后,做好标记,将酶标板置于37℃反应30min。

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四、操作步骤4.洗板 取出96孔酶标板,甩去一抗液,每孔加洗涤液200µl,轻轻振荡1min,拍干,重复洗涤操作3次。

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四、操作步骤5.加二抗 在酶标板各孔加入HRP标记羊抗兔IgG(1:5000稀释)100µL,将酶标板置于37℃反应30min。

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四、操作步骤6.洗板 共洗涤5次。7.加底物 在酶标板各孔加入TMB显色液 100µl,避光室温静置10min。

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四、操作步骤8.加终止液 在各孔加终止液50µL。9.读数 在630nm波长下以第11孔为空白调零后,读数。

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四、操作步骤10.结果判断

判断标准:以大于阴性血清OD值2.1倍的最高待检血清稀释倍数,作为血清的效价。