Workshop on Plant Science Techniques: Rhizogenesis, Auxin, and Cell Cycle

1. Responsables : A. Guivarc’h et C. Cabassa Equipe pédagogique :C. Cabassa, E. Carnero, A. Guivarc’h, S. Planchais, J. Puyaubert. Aide technique : U. Barbe, G. Belleau Objectif de l’UE L’analyse de mutants et de plantes transgéniques est aujourd'hui devenue indispensable pour comprendre la biologie des plantes ou les améliorer génétiquement. L'objectif de cet atelier est de former à des techniques de pointes utilisées en laboratoires lors de la construction et caractérisation de ces mutants et plantes transgéniques. Il sera réalisé au travers d’une étude de l’initiation de la rhizogenèse latérale chez Arabidopsis thaliana, visant à mettre en évidence l’implication de l’auxine et de certains gènes du cycle cellulaire dans ce phénomène. Atelier technologique de M1S1 appliqué aux sciences du végétal: Rhizogenèse, Auxine et Cycle Cellulaire Contenu : A/ Bio-informatique: régulation d’expression de gènes in silico, criblage de banques de mutants et détermination de couples d’amorces utilisables pour la PCR, RT-PCR et RT-QPCR. B/ Discussion sur le choix des vecteurs et des techniques de transformation selon le modèle végétal C/ Caractérisation morphologique et moléculaire de plantes transgéniques. Comparaison phénotypique mutant/sauvage. a) Génotypage (extraction d'ADN et caractérisation moléculaire par PCR) b) Comparaison de phénotypes mutants par rapport à un sauvage: analyse morphométrique à l’aide d’outils bioinformatiques disponibles en « open source » (ImageJ, neuronJ) c) Expression de gènes du cycle cellulaire au cours de la rhizogenèse latérale (extraction d'ARN puis RT-PCR et RT-QPCR) d) - Localisation spatiale et temporelle de l'expression de transgènes (fusion promoteur::gène rapporteur GUS) - Localisation tissulaire et cellulaire de protéines (fusion protéine::GFP) en microscopie à fluorescence. Fusion transcriptionnelle promoteur::GUS Fusion traductionnelle protéine::GFP