slide1 l.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
ชนิดของกล้องจุลทรรศน์ PowerPoint Presentation
Download Presentation
ชนิดของกล้องจุลทรรศน์

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 60

ชนิดของกล้องจุลทรรศน์ - PowerPoint PPT Presentation


  • 612 Views
  • Uploaded on

ชนิดของกล้องจุลทรรศน์ กล้องจุลทรรศน์ชนิดที่ใช้แสง Bright-field microscope Dark-field microscope Phase-contrast microscope Fluorescence microscopes กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง กำลังขยายโดยทั่วไป 1000 – 2000 เท่า ภาพที่ได้จะเป็นภาพที่ทึบ พื้นหลังสว่าง ประกอบด้วยเลนส์ใกล้วัตถุหลายอัน

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'ชนิดของกล้องจุลทรรศน์' - Olivia


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1
ชนิดของกล้องจุลทรรศน์ชนิดของกล้องจุลทรรศน์
  • กล้องจุลทรรศน์ชนิดที่ใช้แสง
    • Bright-field microscope
    • Dark-field microscope
    • Phase-contrast microscope
    • Fluorescence microscopes
slide2
กล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสงกล้องจุลทรรศน์แบบใช้แสง
  • กำลังขยายโดยทั่วไป 1000 – 2000 เท่า
  • ภาพที่ได้จะเป็นภาพที่ทึบ พื้นหลังสว่าง
  • ประกอบด้วยเลนส์ใกล้วัตถุหลายอัน
    • parfocal microscopes remain in focus when objectives are changed
  • กำลังขยายของภาพ

= กำลังขยายของเลนส์ใกล้ตา x กำลังขยายของเลนส์ใกล้วัตถุ

resolution power
รายละเอียดของภาพ (Resolution power)
  • ความสามารถในการแยกจุด 2 จุดออกจากกัน
  • ความยาวคลื่นแสง

shorter wavelength  greater resolution

slide4

Eyepiece

กล้องจุลทรรศน์

Binocular tube

Revolving nosepiece

Arm

Objective

Mechanical stage

Fine adjustment

Stage

Course adjustment

Condenser

Illuminator

Base

slide5
ความสามารถในการขยายภาพของกล้องจุลทรรศน์ความสามารถในการขยายภาพของกล้องจุลทรรศน์
  • Resolution power
    • ความสามารถของเลนส์ใกล้วัตถุในการแยกจุดสองจุดที่อยู่ใกล้กัน

R = 0.6 x /NA

  • Numerical aperture
    • ความสามารถของเลนส์ใกล้วัตถุในการเก็บรวบรวมแสงที่หักเหภายในวัตถุ

NA = n sin 

slide6

Working distance

Low power

High power

slide7

Working distance

Oil Immersion

slide8

Property

Objective lens

Scanning

Low power

High power

Oil Immersion

magnification

4x

10x

40-45x

90-100x

Numerical aperture

0.1

0.25

0.55-0.65

1.25-1.4

Focal length

40 mm

16 mm

4 mm

1.8-2.0 mm

Working distance

17-20 mm

4-8 mm

0.5-0.7 mm

0.1 mm

Resolution power

(WL= 450 nm; blue light)

2.3 m

0.9 m

0.35 m

0.18 m

  • คุณสมบัติของเลนส์ใกล้วัตถุ
  • working distance
    • - ระยะระหว่างเลนส์ใกล้วัตถุ กับผิวของแผ่น กระจกปิดตัวอย่าง หรือ ตัวอย่าง
the 3 classes of objectives
The 3 Classes of Objectives

Chromatic and Mono-Chromatic Corrections

dark field microscope
กล้องพื้นหลังมืด (Dark-Field Microscope)
  • ภาพที่เกิดจะสว่างกว่าพื้นหลัง
  • ใช้ในการศึกษาตัวอย่างที่มีชีวิต และไม่ต้องการย้อมสี ns
phase contrast microscope
Phase-contrast microscope
  • ภาพที่เกิดจะแสดงให้เห็นความแตกต่าง โครงสร้างภายในที่เกิดจากการหักเหของแสงที่แตกต่าง
  • ใช้ในการศึกษาเซลล์ที่มีชีวิต
  • โปร่งใสและไม่ต้องย้อมสี
  • เพิ่ม annual diaphragm ใต้ condenser และ phase plate ใน objective lens
  • wave length ~ 1/4 ของปกติ
fluorescence microscope
Fluorescence Microscope
  • ใช้แสง ultraviolet, violet หรือ blue light
  • ตัวอย่างถูกย้อมด้วย สี fluorochromes
  • ภาพที่เกิด ตัวอย่างหรือ ส่วนที่ถูกย้อมด้วยสีจะเรืองแสง และพื้นหลังจะมืด
slide21
การเตรียมตัวอย่างและการย้อมสีการเตรียมตัวอย่างและการย้อมสี
  • เพิ่มความสามารถในการมองเห็นตัวอย่างให้ชัดเจนขึ้น
  • ช่วยให้เห็นรูปร่างลักษณะของตัวอย่างได้ชัดเจนขึ้น
  • เก็บรักษาตัวอย่าง
fixation
Fixation
  • หยุดกิจกรรมต่างๆ ภายในเซลล์
  • เป็นขั้นตอนที่รักษาโครงสร้างทั้งภายนอกและภายในตัวอย่างให้อยู่ในสภาพคงที่
  • เป็นการทำให้ตัวอย่างติดแน่นอยูบนแผ่นกระจกสไลด์
    • โดยการใช้ความร้อน
      • เป็นการรักษารูปร่างให้คงที่แต่ไม่รักษาโครงสร้างภายใน
    • โดยการใช้สารเคมี
      • เป็นการรักษาโครงสร้างภายใน รูปร่าง เช่น Formaldehyde, Odmium tetroxide (Os4) , potassium permanganate, Glutaraldehyde
dehydration and simple staining
การทำให้แห้ง และย้อมสีแบบง่าย (dehydration and simple staining)
  • สี (stain)
    • ทำให้สามารถมองเห็นโครงสร้างภายในและภายนอกได้ชัดเจนยิ่งขึ้น และแตกต่างจากพื้นหลัง
  • การย้อมสีแบบง่าย
    • ใช้สีเพียงสีเดียว
    • เช่น สีเบสิค (basic dyes)
electron microscopy
Electron Microscopy
  • ใช้ลำแสงอิเล็คตรอนในการสร้างภาพ
  • ความยาวคลื่นแสงสั้นกว่าแสงทำให้ภาพที่เกิดขึ้นมีรายละเอียดสูงขึ้น
transmission electron microscope
Transmission Electron Microscope
  • electrons scatter when they pass through thin sections of a specimen
  • transmitted electrons (those that do not scatter) are used to produce image
  • denser regions in specimen, scatter more electrons and appear darker
the scanning electron microscope
The Scanning Electron Microscope
  • uses electrons reflected from the surface of a specimen to create image
  • produces a 3-dimensional image of specimen’s surface features
confocal microscopy
Confocal microscopy
  • have extremely high resolution
  • can be used to observe individual atoms
confocal microscopy34
Confocal Microscopy
  • confocal scanning laser microscope
  • laser beam used to illuminate spots on specimen
  • computer compiles images created from each point to generate a 3-dimensional image
molecule

Biochemical Techniques

วัตถุประสงค์

เพื่อศึกษาคุณสมบัติและหน้าที่ของส่วนประกอบต่างๆ ของเซลล์

Molecule

Small

Assembly of macromolecule

Large

slide38

หลักการ

คือ การทำให้เซลล์แตกเป็นชิ้นส่วน (Cell fractination) และเก็บชิ้นส่วนของเซลล์มาศึกษา โดย

1. การทำให้เป็นเนื้อเดียวกัน (Homogenization) สามารถทำได้หลายวิธีคือ

1. โดยการบด (Pestle /Moltar)

2. การใช้คลื่นเสียง (Ultrasonic vibration)

3. การสับเป็นชิ้นๆ (Wareing bleden/ Potter homogenizers)

4. การทำให้แข็งตัวและละลาย (Freeze and Thaw)

5. การอัดด้วยความดันสูง (Deactivation)

6. การใช้สารเคมี (Chemical)

7. การใช้เอนไซม์ (Enzyme)

homogenizer
Homogenizer

http://www.freewebs.com/ltaing/chpt7.3Cellfractionation.gif

gel filtration
Gel Filtration

http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/150/protein/proteinsb.htm

slide43
2. การแยกส่วนประกอบต่างๆ ออกจากกัน

(Separation of the homogenate)

1. การปั่นตกตะกอน (Centrifugation)

- Gravity (g)

- Relative centrifugal force (RFC)

- Rate of sedimentation of components

(size, shape, density of particle and solvent, speed) - Differential centrifugation

- Rate-zonal or density-gradient centrifugation

differential centrifigation
Differential Centrifigation

http://www.freewebs.com/ltaing/chpt7.3Cellfractionation.gif

differential centrifigation45
Differential Centrifigation

http://www.freewebs.com/ltaing/chpt7.3Cellfractionation.gif

slide46
3. การแยกชิ้นส่วนของเซลล์ (Separation of biomolecules)

1. ความสามารถในการละลาย (Solubility)

2. ขนาด (size)

- Centrifugation

- Dialysis

- Ultrafiltration

- Gel filtration

- SDS -PAGE (Sodium Dodecyl Sulphate Polyacrylamide Gel Electrophoresis)

slide49
3. ประจุไฟฟ้า (Charge)

Ion exchange chromatography

Isoelectric focusing

Electrophoresis

4. Biological properties

Affinity of chromatography

Immunoelectrophoresis

Blotting - Southern blot (DNA)

- Northern blot (RNA)

- Western blot (Protein)

Chromatography อื่นๆ (paper. Gas , Thin-layer)

PCR (Polymerase chain reaction)

ion exchange
Ion Exchange

http://fig.cox.miami.edu/~cmallery/150/protein/ion_exchange.jpg

immunoelectrophoresis
Immunoelectrophoresis

http://www.haps.nsw.gov.au/edrsrch/edimages/myeloma2.jpg

slide52
Southern blot

เป็นเทคนิคที่ศึกษา DNA ที่ได้ทำการแยกด้วย agarose gel electrophoresis

slide53
Northern blot

เป็นเทคนิคที่ศึกษา RNA

slide56
PCR (Polymerase Chain Reaction)

เป็นการเพิ่มปริมาณ DNA ที่ต้องการศึกษา โดยการใช้เครื่องเพิ่มปริมาณ DNA ประกอบด้วยขั้นตอน

1. Denaturation เป็นการแยกสาย DNA จากสายคู่ให้เป็นสายเดี่ยว โดยใช้ความร้อน ประมาณ 90-95oC

2. Annealing เป็นการลดอุณหภูมิลงเพื่อให้ Primer มาจับกับสาย DNA ต้นแบบ โดยใช้ความร้อน ประมาณ 50-55oC

3. Extension (primer extension, synthesis) โดยใช้ความร้อน ประมาณ 70-75oC

buffer optimalization
Buffer Optimalization
  • 10 mM Tris HCl, pH 8.3
  • 50 mM KCl
  • 1.5 - 2.5 mM MgCl2
  • 50 - 200 mM dNTP
  • DNA template concentration
  • Optional compounds
primer considerations
Primer Considerations
  • Primer lengths
  • GC contents
  • Melting temperature
    • Tm = 2(T+A)+4(G+C)
  • Tm difference
  • 3’ and 5’ end considerations