PRUEBAS DIAG NÓSTICAS EN VIH/SIDA- parte 3

1. PRUEBAS DIAGNÓSTICAS EN VIH/SIDA- parte 3 CARLOS ALVAREZ. MD.DTMH

2. Otras pruebas… Saliva: OraSure: S: 99.24% E: 99.89% Orina Calypte S: 99% E: 94%

3. GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDABasada en la EvidenciaCOLOMBIA2006 Diagnóstico en embarazo: Ofrecimiento y realización de la prueba recomendada con consentimiento para aceptación o rechazo. Indicaciones de repetición en tercer trimestre. Uso de pruebas rápidas Recomendaciones de interpretación

4. GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDABasada en la EvidenciaCOLOMBIA2006 Detección en el Hijo de Mujer Infectada: Indicaciones de carga viral. Flujograma de diagnóstico con pruebas de detección de ácidos nucleicos e interpretación.

5. GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDARecomendaciones Prueba de genotipificación No ordene pruebas de genotipificación en pacientes con problemas activos de incumplimiento, intolerancia, o inconsistencia en la toma de medicamentos (III A). Siempre confirme fracaso virológico y carga viral mayor a 1000 copias antes de ordenar una prueba de genotipificación (II A). La prueba de genotipificación debe realizarse en pacientes que se presentan con unsegundo o tercerfracaso terapéutico previa autorización de experto en enfermedades infecciosas o VIH-SIDA (I B).

6. GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDARecomendaciones Prueba de genotipificación La prueba de genotipificación debe interpretarse con la participación de un experto en enfermedades infecciosas o en VIH-SIDA (I B). La conducta que se derive de la información de las pruebas de genotipificacion debe ser siempre supervisada por un experto en enfermedades infecciosas o en VIH-SIDA (IIIA). El paciente debe estar consumiendo el régimen que fracasa en el momento en que se le toma la muestra para la prueba de genotipificación o dentro de las dos a cuatro semanas posteriores a su suspensión (II B).

7. Mutaciones relacionadas con la resistencia a las drogas antiretrovirales L10I K20M D30N M36I M46I G48V I54V V82A I84V N88D L90M Saquinavir Indinavir Nelfinavir Ritonavir Amprenavir Inhibidores de la Proteasa Mutaciones primarias Mutaciones secundarias Polimorfismos www.hiv-web.lanl.gov

8. Genotipo: predicción de resistencia 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 SI Magnitud de resistencia a drogas NO Todos los virus con L90M deberían tener resistencia uniforme a saquinavir HIV obtenidos de 78 pacientes

9. Fenotipo: medida directa de resistencia 1,000 100 10 1 0 Magnitud de resistencia a drogas 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 HIV obtenidos de 78 pacientes

10. Fenotipo: medida directa de resistencia 40% de virus con L90M permanecen sensibles a saquinavir Punto de corte de sensibilidad 1,000 100 10 1 0 Magnitud de resistencia a drogas 1 6 11 16 21 26 31 36 41 46 51 56 61 66 71 76 HIV obtenidos de 78 pacientes

11. Ensayo Fenotípico: ANTIVIROGRAM Aislamiento del gen PR/RT PLASMA PR/RT GENES RNA cDNA (amplicones) ( > 200 µl) RT PCR extración PACIENTE Plásmido con genoma VIH (excep PR/RT) Transfección del gen (Electropor) PRO RT PRO RT Delección & (MT4) Virus WT genes Clon proviral deleccionado VR Susceptibilidad del ensayo

12. SUSCEPTIBILIDAD Sensible: IC50 4< Cepa Ref Parc.Res:IC50 4-10 > Cep.Ref Resistente: IC50 +10> Cep.Ref

13. Cebador marcado para replicación Cadena a secuenciar RT-PCR 4 mezclas de reacción que incluye cada uno de los diferentes ddNTP que paran la replicación Amplicones Extracción RNA viral cDNA Separación de productos por electroforesis Productos de la reacción de replicación Electroferograma Plasma MÉTODOS GENOTÍPICOS: Secuenciación

14. Algoritmos Trugene HIV-1 Report Generator (Visible Genetics). Retrogram Software v 1.2 (Viroloy Networks) ANRS AC11 v 2.000 Detroit Medical Center, Grupo de Aconselhamento Virológico, CHL V3.2, Rega v 5.0 (estos 5 accesibles a través de la empresa Advanced Biological Laboratories, SA) Resistance Collaborative Group, Stanford University HIV Database (estos 2 accesibles a través de Beta Test HIV Algorithm Comparison, Stanford University) ADRA (Los Alamos Resistance Database) Geno2phenosense(Arevir, Analyse Von Resistenzmutatione bei HIV).

15. VirtualPhenotype® - Cómo funciona Información genotípica Información fenotípica Secuencia (pregunta a la base de datos) > 85.000 > 45.000 >35.000 muestras comprobadas Información de VirtualPhenotype (media del fenotipo)

16. vircoTYPE REPORT RESISTANCE ANALYSIS vircoTYPE page 1

17. Page 2: Details

18. Informe de VirtualPhenotype® Veces de cambio en la IC50 (corte para el rango normal de susceptibilidad) Proporción de muestras iguales: Fármaco Pares en base de datos Por encima de rango normal desusceptibilidad, pero por debajo de valor clínico de corte 2, 3, 4 Por encima de rango normal desusceptibilidad 2 Nombre comercial En rango normal desusceptibilidad 2 Nombre genérico Zidovudina Lamivudina Didanosina Zalcitabina Estavudina Abacavir Tenofovir DF Nevirapina Delavirdina Efavirenz Un componente de Kaletra®

19. ¿Qué es mejor?Fenotipo real:- Prueba real- Alta variabilidad intrapruebaCosto !!Genotipo:- Interpretación complejaFenotipo virtual:- Medida de probabilidad estadística- Mayor precisión- Problema en la definición de veces significativas: biológicos y clínicos

20. Mutaciones relacionadas con la resistencia a las drogas antiretrovirales

21. www.iasusa.org

22. www.iasusa.org

23. www.iasusa.org

24. www.iasusa.org