pruebas diag n sticas en vih sida parte 3 l.
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PRUEBAS DIAG NÓSTICAS EN VIH/SIDA- parte 3

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PRUEBAS DIAG NÓSTICAS EN VIH/SIDA- parte 3. CARLOS ALVAREZ. MD.DTMH. Otras pruebas…. Saliva: OraSure: S: 99.24% E: 99.89% Orina Calypte S: 99% E: 94%. GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDA Basada en la Evidencia COLOMBIA 2006. Diagnóstico en embarazo:

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otras pruebas
Otras pruebas…

Saliva:

OraSure:

S: 99.24%

E: 99.89%

Orina

Calypte

S: 99%

E: 94%

guia para el manejo de vih sida basada en la evidencia colombia 2006
GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDABasada en la EvidenciaCOLOMBIA2006

Diagnóstico en embarazo:

Ofrecimiento y realización de la prueba recomendada con consentimiento para aceptación o rechazo.

Indicaciones de repetición en tercer trimestre.

Uso de pruebas rápidas

Recomendaciones de interpretación

guia para el manejo de vih sida basada en la evidencia colombia 20064
GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDABasada en la EvidenciaCOLOMBIA2006

Detección en el Hijo de Mujer Infectada:

Indicaciones de carga viral.

Flujograma de diagnóstico con pruebas de detección de ácidos nucleicos e interpretación.

guia para el manejo de vih sida recomendaciones prueba de genotipificaci n
GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDARecomendaciones Prueba de genotipificación

No ordene pruebas de genotipificación en pacientes con problemas activos de incumplimiento, intolerancia, o inconsistencia en la toma de medicamentos (III A).

Siempre confirme fracaso virológico y carga viral mayor a 1000 copias antes de ordenar una prueba de genotipificación (II A).

La prueba de genotipificación debe realizarse en pacientes que se presentan con unsegundo o tercerfracaso terapéutico previa autorización de experto en enfermedades infecciosas o VIH-SIDA (I B).

guia para el manejo de vih sida recomendaciones prueba de genotipificaci n6
GUIA PARA EL MANEJO DE VIH / SIDARecomendaciones Prueba de genotipificación

La prueba de genotipificación debe interpretarse con la participación de un experto en enfermedades infecciosas o en VIH-SIDA (I B).

La conducta que se derive de la información de las pruebas de genotipificacion debe ser siempre supervisada por un experto en enfermedades infecciosas o en VIH-SIDA (IIIA).

El paciente debe estar consumiendo el régimen que fracasa en el momento en que se le toma la muestra para la prueba de genotipificación o dentro de las dos a cuatro semanas posteriores a su suspensión (II B).

mutaciones relacionadas con la resistencia a las drogas antiretrovirales
Mutaciones relacionadas con la resistencia a las drogas antiretrovirales

L10I K20M D30N M36I M46I G48V I54V V82A I84V N88D L90M

Saquinavir

Indinavir

Nelfinavir

Ritonavir

Amprenavir

Inhibidores de la Proteasa

Mutaciones primarias

Mutaciones secundarias

Polimorfismos

www.hiv-web.lanl.gov

genotipo predicci n de resistencia
Genotipo: predicción de resistencia

1

6

11

16

21

26

31

36

41

46

51

56

61

66

71

76

SI

Magnitud de resistencia a drogas

NO

Todos los virus con L90M

deberían tener resistencia

uniforme a saquinavir

HIV obtenidos de 78 pacientes

fenotipo medida directa de resistencia
Fenotipo: medida directa de resistencia

1,000

100

10

1

0

Magnitud de resistencia a drogas

1

6

11

16

21

26

31

36

41

46

51

56

61

66

71

76

HIV obtenidos de 78 pacientes

fenotipo medida directa de resistencia10
Fenotipo: medida directa de resistencia

40% de virus con

L90M permanecen

sensibles a

saquinavir

Punto de corte

de sensibilidad

1,000

100

10

1

0

Magnitud de resistencia a drogas

1

6

11

16

21

26

31

36

41

46

51

56

61

66

71

76

HIV obtenidos de 78 pacientes

slide11

Ensayo Fenotípico: ANTIVIROGRAM

Aislamiento del gen PR/RT

PLASMA

PR/RT GENES

RNA

cDNA

(amplicones)

(

>

200 µl)

RT

PCR

extración

PACIENTE

Plásmido con genoma VIH (excep PR/RT)

Transfección del gen (Electropor)

PRO

RT

PRO

RT

Delección

&

(MT4)

Virus WT

genes

Clon proviral deleccionado

VR

Susceptibilidad del ensayo

slide12

SUSCEPTIBILIDAD

Sensible: IC50 4< Cepa Ref

Parc.Res:IC50 4-10 > Cep.Ref

Resistente: IC50 +10> Cep.Ref

slide13

Cebador marcado para

replicación

Cadena a secuenciar

RT-PCR

4 mezclas de reacción que incluye

cada uno de los diferentes ddNTP

que paran la replicación

Amplicones

Extracción

RNA viral

cDNA

Separación de productos por electroforesis

Productos de la reacción de replicación

Electroferograma

Plasma

MÉTODOS GENOTÍPICOS: Secuenciación

algoritmos
Algoritmos

Trugene HIV-1 Report Generator (Visible Genetics).

Retrogram Software v 1.2 (Viroloy Networks)

ANRS AC11 v 2.000

Detroit Medical Center, Grupo de Aconselhamento Virológico, CHL V3.2, Rega v 5.0 (estos 5 accesibles a través de la empresa Advanced Biological Laboratories, SA)

Resistance Collaborative Group, Stanford University HIV Database (estos 2 accesibles a través de Beta Test HIV Algorithm Comparison, Stanford University)

ADRA (Los Alamos Resistance Database)

Geno2phenosense(Arevir, Analyse Von Resistenzmutatione bei HIV).

virtual phenotype c mo funciona
VirtualPhenotype® - Cómo funciona

Información

genotípica

Información

fenotípica

Secuencia

(pregunta a la base de datos)

> 85.000

> 45.000

>35.000 muestras comprobadas

Información de VirtualPhenotype (media del fenotipo)

slide16

vircoTYPE REPORT

RESISTANCE ANALYSIS

vircoTYPE page 1

slide18

Informe de VirtualPhenotype®

Veces de cambio en la IC50

(corte para el rango normal de susceptibilidad)

Proporción de muestras iguales:

Fármaco

Pares en base de datos

Por encima de rango normal desusceptibilidad, pero por debajo de valor clínico de corte 2, 3, 4

Por encima de rango normal desusceptibilidad 2

Nombre comercial

En rango normal desusceptibilidad 2

Nombre genérico

Zidovudina

Lamivudina

Didanosina

Zalcitabina

Estavudina

Abacavir

Tenofovir DF

Nevirapina

Delavirdina

Efavirenz

Un componente de Kaletra®

slide19

¿Qué es mejor?Fenotipo real:- Prueba real- Alta variabilidad intrapruebaCosto !!Genotipo:- Interpretación complejaFenotipo virtual:- Medida de probabilidad estadística- Mayor precisión- Problema en la definición de veces significativas: biológicos y clínicos