1 / 8

דנ"א רקומביננטי בחקר חלבון ממברנלי- NhaA

דנ"א רקומביננטי בחקר חלבון ממברנלי- NhaA. נסיון מס' 4: למוד מבנה האוליגומר אסף בהט assafbahat@yahoo.com עדי אוגד adi_oged@yahoo.com. kDa. control. BMH. p-PDM. o-PDM. 62. דימר. 47.5. 32.5. מונומר. 25. 10.16 Å. 16.5. 11.13Å. 9.39Å.

zazu
Download Presentation

דנ"א רקומביננטי בחקר חלבון ממברנלי- NhaA

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. דנ"א רקומביננטי בחקר חלבון ממברנלי- NhaA נסיון מס' 4:למוד מבנה האוליגומר אסף בהט assafbahat@yahoo.com עדי אוגד adi_oged@yahoo.com

  2. kDa control BMH p-PDM o-PDM 62 דימר 47.5 32.5 מונומר 25 10.16Å 16.5 11.13Å 9.39Å שימוש ב-cross linkers לבדיקת מצב האוליגומריזציה

  3. מסקנות לגבי מצב האוליגומריזציה: • הוספת כל אחד מהמגשרים גרמה לעליה בכמות החלבון הדימרי לעומת המונומרי. • העליה תלויה חיובית באורך המגשר – p-PDM, המגשר הארוך ביותר, גרם לדימריזציה הרבה ביותר.

  4. kDa V254C H225C - - + + MTSET 62 47.5 32.5 25 16.5 גילוי שיירים חשופים למדיום:פלורסנציה

  5. kDa V254C H225C - - MTSET + + 62 47.5 32.5 25 16.5 גילוי שיירים חשופים למדיום:צביעת coomassie

  6. מסקנות לגבי מיקום השיירים: • הסימון של המוטנט V254C ע"י NEM פלורסנטי לא ירד כתוצאה מחשיפה מוקדמת ל- MTSET (ההבדל בפלורסנציה נובע מההבדל בכמות החלבון), כלומר שייר זה אינו פונה לפריפלסמה. • רמת הפלורסנציה של המוטנט H225C יורדת באופן ברור כתוצאה מחשיפה ל- MTSET, כלומר שייר זה נמצא ב- loop פריפלסמטי.

  7. מדידת פעילות לאחר טיפול ב-p-PDM

  8. מסקנות לגבי הפעילות לאחר טיפול ב-p-PDM: • פעילות המשחלף עולה עם עליית ה- pH. • הטיפול ב- p-PDM מגביר את פעילות המשחלף ב- pH 7 ו- 7.5, ולא גורם להבדל ב- pH 8. • סביר שהגברת הדימריזציה משפרת את הפעילות, ואפשרי שירידת החומציות מעודדת דימריזציה ולכן ב- pH הגבוהה לא היתה השפעה ל- p-PDM.

More Related