ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים
This presentation is the property of its rightful owner.
Sponsored Links
1 / 9

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה PowerPoint PPT Presentation


  • 83 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה. רוני חזן דניאל שנפלד. 254. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. 388. 319. 245. 152. 205. 225. 178. 288. 119. 352. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH.

Download Presentation

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


4 nhaa

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים

ללמוד מצב האוליגומריזציה

של NhaA בממברנה

רוני חזן

דניאל שנפלד


4 nhaa

254

ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים

388

319

245

152

205

225

178

288

119

352


4 nhaa

ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים

החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH

מרקר

ללא טיפול

o-PDM

p-PDM

BMH

kDa

62

דימר

47.5

32.5

מונומר

25


4 nhaa

תוצאות ניסוי 1

  • ללא טיפול רוב החלבון נשאר במצב מונומרי אולם יש כמות משמעותית הנמצאת כדימר

  • בשימוש במגשר מס' 2 pPDM (מגשר במרחק של כÅ10) קיבלנו העברה מירבית לצורת הדימר

  • גם המגשר o-PDM (מגשר כÅ6) נתן דימריזציה גבוהה

  • המגשר BMH ארוך יותר (Å16), אך גמיש

  • תוצאות אלה מראות שהמרחק בין שתי היחידות של הדימר הינו בטווח של Å10


4 nhaa

254

ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום

388

319

245

152

205

225

178

288

119

352


4 nhaa

ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום

coomassie

UV

225 NEM

254NEM

225 NEM

254NEM

מרקר

254

225

254

225

הcoomassie ששימש לביקורת מראה שבכל הבאריות כמות זהה פחות או יותר של חלבון


4 nhaa

תוצאות ניסוי 2

  • מוטנט V254C הפונה לציטופלסמה נשאר מסומן לפני ואחרי הטיפול בNEM כלומר הוא לא נקשר ע"י MTSET בתא השלם

  • במוטנט H225C הפונה לפריפלזמה חל ירידה בסימון לאחר הטיפול עם NEM כלומר הוא היה חשוף למדיום כשהתא היה שלם

  • ניתן להסיק מכך שהלולאה המכילה את עמדה 225 פונה לציטופלזמה


4 nhaa

ניסוי 3 – מדידת פעילות החלבון המוטנטי V254C לאחר טיפול במגשר p-PDM


4 nhaa

  • מוטנט V254C שלא עבר טיפול עם מגשר מראה גרף פעילות התלוי בpH – פעילותו עולה כאשר הpH עולה.

  • טיפול במגשר גורם להסטה של פרופיל הפעילות כתלות בpH – גם בpH נמוך הפעילות עדיין גבוהה יחסית

  • ייתכן והדבר נובע מהקישור הקשיח של המגשר המגביל את שינויי הקונפורמציה שהלולאה יכולה לעבור


  • Login