ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים
Sponsored Links
This presentation is the property of its rightful owner.
1 / 9

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה PowerPoint PPT Presentation


  • 93 Views
  • Uploaded on
  • Presentation posted in: General

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה. רוני חזן דניאל שנפלד. 254. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. 388. 319. 245. 152. 205. 225. 178. 288. 119. 352. ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים. החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH.

Download Presentation

ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים ללמוד מצב האוליגומריזציה של NhaA בממברנה

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -

Presentation Transcript


ניסוי 4 - שימוש במגשרים כימיים

ללמוד מצב האוליגומריזציה

של NhaA בממברנה

רוני חזן

דניאל שנפלד


254

ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים

388

319

245

152

205

225

178

288

119

352


ניסוי 1 – טיפול בממברנות עם מגשרים שונים

החלבון המטופל הוא NhaA-cys-less-V254C-AXH

מרקר

ללא טיפול

o-PDM

p-PDM

BMH

kDa

62

דימר

47.5

32.5

מונומר

25


תוצאות ניסוי 1

  • ללא טיפול רוב החלבון נשאר במצב מונומרי אולם יש כמות משמעותית הנמצאת כדימר

  • בשימוש במגשר מס' 2 pPDM (מגשר במרחק של כÅ10) קיבלנו העברה מירבית לצורת הדימר

  • גם המגשר o-PDM (מגשר כÅ6) נתן דימריזציה גבוהה

  • המגשר BMH ארוך יותר (Å16), אך גמיש

  • תוצאות אלה מראות שהמרחק בין שתי היחידות של הדימר הינו בטווח של Å10


254

ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום

388

319

245

152

205

225

178

288

119

352


ניסוי 2 - גילוי שיירים חשופים למדיום

coomassie

UV

225 NEM

254NEM

225 NEM

254NEM

מרקר

254

225

254

225

הcoomassie ששימש לביקורת מראה שבכל הבאריות כמות זהה פחות או יותר של חלבון


תוצאות ניסוי 2

  • מוטנט V254C הפונה לציטופלסמה נשאר מסומן לפני ואחרי הטיפול בNEM כלומר הוא לא נקשר ע"י MTSET בתא השלם

  • במוטנט H225C הפונה לפריפלזמה חל ירידה בסימון לאחר הטיפול עם NEM כלומר הוא היה חשוף למדיום כשהתא היה שלם

  • ניתן להסיק מכך שהלולאה המכילה את עמדה 225 פונה לציטופלזמה


ניסוי 3 – מדידת פעילות החלבון המוטנטי V254C לאחר טיפול במגשר p-PDM


  • מוטנט V254C שלא עבר טיפול עם מגשר מראה גרף פעילות התלוי בpH – פעילותו עולה כאשר הpH עולה.

  • טיפול במגשר גורם להסטה של פרופיל הפעילות כתלות בpH – גם בpH נמוך הפעילות עדיין גבוהה יחסית

  • ייתכן והדבר נובע מהקישור הקשיח של המגשר המגביל את שינויי הקונפורמציה שהלולאה יכולה לעבור


  • Login