PRÁCTICO N° 6
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PRÁCTICO N° 6. Interacciones microorganismos - planta. Objetivo : Conocer las técnicas de laboratorio para el manejo de microorganismos que interactúan con las plantas. Interacciones más comunes. Positivas (sinérgicas) Simbiosis (micorrizas, rizobios) Mutualismo ( Azozpirillum ).

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Interacciones microorganismos - planta

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Presentation Transcript


Interacciones microorganismos planta

PRÁCTICO N° 6

Interacciones microorganismos - planta

Objetivo: Conocer las técnicas de laboratorio para el manejo de microorganismos que interactúan con las plantas

Interacciones más comunes

  • Positivas (sinérgicas)

  • Simbiosis (micorrizas, rizobios)

  • Mutualismo (Azozpirillum)

  • Negativas (antagónicas)

  • Competencia

  • Amensalismo

  • Aislamiento de microorganismos

  • Selección de cepas

  • Producción de inoculantes

Técnicas de laboratorio


Simbiosis micorrizas

Simbiosis: micorrizas

Ectomicorrizas

Endomicorrizas

Intercelulares

Manto externo

Raíz modificada

Hongos superiores

Cultivables

Intercelulares e intracelulares

Sin manto externo

Sin raíz modificada

Hongos inferiores

No cultivables

Actividad: observar micorrizas en raíces de pino


Interacciones microorganismos planta

nódulos

seleccionar

nódulos turgentes

extraer los

nódulos

lavar

cortar la raíz

1 mL de

H2O estéril

macerar

enjuagar con H2O estéril

desinfectar con

H2O2 (5minutos)

incubar

colorear (Gram -)

estriar en medio YEM

incubar

conservar

repicar

(pico de flauta)

Aislamiento de microorganismos: rizobios


Interacciones microorganismos planta

Aislamiento de microorganismos: rizobios

Extraer los nódulos

Raíz de leguminosa

Desinfectar con H2O2 (20%) 5 minutos

Enjuagar con H2O estéril


Interacciones microorganismos planta

Aislamiento de microorganismos (rizobios)

Colocar los nódulos en un tubo con 1ml de agua estéril

Macerar con varilla de vidrio

Incubar (28-30° C)

Estriar en medio YEM

Extraer una alícuota


Interacciones microorganismos planta

Aislamiento de microorganismos (rizobios)

Colorear y observar

Cultivo de rizobio

Incubar y conservar

Repicar a “pico de flauta”


Interacciones microorganismos planta

Actividades: - realizar macerado de nódulos y colorear

- observar al microscopio bacteroides y bacterias .

Nodulos (A a C) y bacteroides (D a F) deP. sativum cv. (arveja).


Interacciones microorganismos planta

nódulos

seleccionar

nódulos turgentes

extraer los

nódulos

lavar

cortar la raíz

1 mL de

H2O estéril

macerar

enjuagar con H2O estéril

desinfectar con

H2O2 (5minutos)

incubar

colorear (Gram -)

estriar en medio YEM

incubar

conservar

repicar

(pico de flauta)

Síntesis de aislamiento de rizobios


Interacciones microorganismos planta

1 g de raíz

colocar en H2O estéril y agitar

cortar raíz

lavar

incubar

sembrar en medio NFB semisólido

extraer alícuota

crecimiento de Azospirillum

incubar

colorear (Gram -)

aislamiento en medio NFB sólido

incubar

conservar

repicar

(pico de flauta)

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum


Interacciones microorganismos planta

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum

Gramínea

Cortar raíces

Suspender en H2O estéril

Extraer alícuota

Agitar


Interacciones microorganismos planta

Aislamiento de microorganismos: Azospirillum

Incubar

Sembrar en medio NFB semisólido

Halo de crecimiento de Azospirillum

Repicar a “pico de flauta"

Incubar y conservar


Interacciones microorganismos planta

1 g de raíz

colocar en H2O estéril y agitar

cortar raíz

lavar

incubar

sembrar en medio NFB semisólido

extraer alícuota

crecimiento de Azospirillum

incubar

colorear (Gram -)

aislamiento en medio NFB sólido

incubar

conservar

repicar

(pico de flauta)

Síntesis de aislamiento de Azozpirillum


Interacciones microorganismos planta

Selección de cepas para capacidad fijadora de N

Ensayo de laboratorio: alfalfa

Medio de cultivo: Yensen

Testigo: medio sin N sin inocular

Control: medio sin N inoculado con cepa eficiente

Tratamientos: medio sin N inoculados con cepas a testear

Testigo: medio con N sin inocular


Interacciones microorganismos planta

Testigo

medio sin N

sin inocular

Control

medio sin N

inoculado con cepa eficiente

Tratamientos

medio sin N

inoculados con

cepas a testear

Testigo

medio con N

sin inocular

Síntesis de selección de cepas


Selecci n de cepas par metros de evaluaci n

Selección de cepas: parámetros de evaluación

  • Cantidad de nódulos

  • Color

  • Posición en la raíz

  • Actividad Nasa

  • N en planta

  • Peso de raíz


Interacciones microorganismos planta

Primera etapa

cultivo de iniciación (pie de cuba)

incubar (4-5 días)

50 ml

extraer una alícuota de cultivo conservado

cultivar en medio YEM liquido

(pie de cuba)

colorear

(control del pie de cuba)

filtro de aire

manguera

  • agregar antibiótico

  • colocar el pie de cuba

Segunda etapa

cultivo a gran escala (biodigestor)

aireador

cámara de aire 30%

colorear

(control del inoculante)

incubar

3 o 4 días

Síntesis de producción de inoculante

Medio Ashby

(estéril)


Interacciones microorganismos planta

Producción de inoculantes

Mangueras

Tapones

Biodigestores

Filtro de aire

Mechero

Aireador


Producci n de inoculantes

Producción de inoculantes

Planta Industrial

Actividad: observar un biodigestor


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