Fernanda de Souza Gomes Kehdy Orientadora: Profª Maria Cristina Lima de Castro Co-orientadora: Profª Cleusa Graça da Fon

1. Avaliação dos efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas sobre agentes sanitários da Fundação Nacional de Saúde do Estado de Minas Gerais Fernanda de Souza Gomes Kehdy Orientadora: Profª Maria Cristina Lima de Castro Co-orientadora: Profª Cleusa Graça da Fonseca

2. Introdução • Pesticidas • Seletividade dos pesticidas Risco tóxico para humanos

3. Introdução • Tipos de intoxicações: • Aguda • Sub-crônica • Crônica

4. Introdução Potencial genotóxico CARCINOGÊNESE • Biomonitoramento genotoxicológico

5. Introdução • Biomarcadores: - análise de aberrações cromossômicas; - análise de troca entre cromátides irmãs; - frequência de micronúcleos;

6. Introdução • Micronúcleos: • Efeito aneugênico

7. Introdução • Micronúcleos: • Efeito clastogênico

8. Introdução agentes clastogênicos • Micronúcleos agentes aneugênicos - Teste de genotoxicidade in vitro; - Biomarcador p/ efeito de exposição a genotóxicos; (Norppa et al.,2003)

9. Introdução • Vantagens do teste do micronúcleo: - Mais simples; - Treinamentos mais curtos; - Mais rápido; - Requer menos custo; - Maior poder estatístico;

10. Danos ao DNA Ativação oncogenes Introdução • Fator de risco p/ câncer p53; Inibição do ciclo celular p53 Reparo do DNA Apoptose

11. Pro72 p53 Apoptose Arg72 Introdução • p53: - Gene TP53; - Cromossomo17p13.1; - 393 aminoácidos; Polimorfismo

12. Introdução • Estado de Minas Gerais: • ~ 3000 agentes sanitários vinculados à FUNASA – aplicam pesticidas para o controle de vetores de doenças (180 reg. metropolitana) • Sexo masculino • Idade: 30 a 50 anos • Pesticidas: piretróides e organofosforados • Não foi feita análise dos efeitos genotóxicos dos pesticidas sobre estes trabalhadores;

13. Introdução

14. Introdução • Falta de concordância entre os resultados: - diferentes condições de exposição (magnitude, uso de equipamentos de proteção); - nº de pesticidas utilizados; - combinação de pesticidas; - tempo e frequência de exposição; - características do indivíduo (idade, sexo, hábito de fumar e ingerir bebidas alcoólicas, estado nutricional); (Bolognesi, 2003)

15. Objetivo geral Avaliar os efeitos genotóxicos da exposição ocupacional a pesticidas em agentes sanitários vinculados à FUNASA, através do biomonitoramento genotoxicológico destes indivíduos, utilizando como biomarcador a frequência de micronúcleos em cultura de linfócitos isolados e estabelecer o genótipo do gene TP53 em relação ao polimorfismo do códon 72 para fins prognósticos.

16. Objetivos específicos • Delineamento das amostras; • Padronização das condições de cultura de linfócitos isolados; • Produção de lâminas; • Determinação da frequência de MN; • Verificação, através de testes estatísticos, de relação entre a frequência de MN e exposição a pesticidas; • Amplificação, través de PCR, de fragmento do TP53 para detecção do genótipo em relação ao códon 72;

17. Metodologia • Grupos amostrais: • Grupo experimental: 30 agentes sanitários vinculados a FUNASA, do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, ocupacionalmente expostos a pesticidas; • Grupo controle: 30 indivíduos do sexo masculino, idade entre 30 e 50 anos, sem história de exposição a pesticidas; 2)Entrevista. (idade, hábitos e exposição)

18. 3)Teste do MN Metodologia

19. Metodologia (Adaptado de Fenech,2000)

20. Metodologia Célula binucleada

21. Metodologia • Características do Micronúcleo: • Morfologia idêntica a dos núcleos principais; • Diâmetro entre 1/16 e 1/3 dos núcleos principais; • Mesma coloração dos núcleos; • Não apresentar refringências; • Não estar conectado a um dos núcleos; • Não estar sobreposto a nenhum dos núcleos; (Fenech, 2000)

22. Metodologia • Parâmetros a serem considerados: - Frequência de MN/1000 cél. binucleadas; - Frequência de células binucleadas micronucleadas/1000 cél. binucleadas; - Distribuição de cél. binucleadas com 0, 1, 2, 3 ou mais MN; (Fenech, 2000)

23. Metodologia Célula binucleada apresentando 1 MN

24. Metodologia Célula binucleada apresentando 2 MN

25. Metodologia Células binucleadas apresentando 3 MN

26. Metodologia Células binucleadas apresentando mais de 3 MN

27. Metodologia • 4) Análises estatísticas: • frequência de MNs • idade • hábito de fumar • ingestão de bebidas alcoólicas • exposição a pesticidas • (tempo e frequência) Teste do qui-quadrado

28. Metodologia 5) Amplificação do TP53:

29. Metodologia

30. Metodologia • 6) Aspectos éticos: • Consentimento livre e esclarecido; • Princípios éticos, aprovados pelo Comitê de Ética em Pesquisa da UFMG.

31. Obrigada!!!