1 / 9

Cystická fibrosa

Cystická fibrosa. Cystická fibrosa. dědičné-autosomálně recesivní (AR) onemocnění závažná a chronicky progredující choroba střední délka života 36,8 let. Multiorgánové postižení: Dýchací cesty : h ustý hlen vede k obstrukci dýchacích cest infekce a sekundární zánětlivý proces

tarik-chandler
Download Presentation

Cystická fibrosa

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Cystickáfibrosa

  2. Cystickáfibrosa • dědičné-autosomálně recesivní (AR) onemocnění • závažná a chronicky progredující choroba • střední délka života 36,8 let • Multiorgánovépostižení: • Dýchací cesty:hustý hlen vede k obstrukci dýchacích cest • infekce a sekundární zánětlivý proces • progresivní destrukce plic. • Pankreas: pankreatickáinsuficience • tuková a proteinová malabsorpci • Játra: jaterní léze, fokální biliární cirhóza • Intestinum: obstrukce střeva,Meconiový illeus(15-20%dětí) • Reprodukční trakt: absence vas deferens, infertilita (95% mužů) • - Kůže: malfunkce potních žláz, zvýšený obsah soli v potu

  3. Cl- TM1 TM2 NBD1 NBD2 R Příčinacystickéfibrosy -mutace v genu CFTR - CFTR kóduje chloridový kanál: cystic fibrosis transmembrane conductance regulator – transport Cl- přes plasmatickou membránu epiteliáních buněk výstelky dýchacích cest a jiných žláz - cAMP regulovaný chloridový kanál TM- transmembránové domény lumen cytoplasma NBD-nucleotid vázající domény (ATP) R-regulační doména (cAMPdep.)

  4. MutaceCFTRgenu • mutace jsou germinální (ve všech buňkách jedince) • somatické nebyly dosud popsány • ancestrální povaha mutací přenášeny z generace na generaci • mutace de novo – velmi vzácně • distribuce mutací je populačně specifická

  5. …E   N   I I F  G   V    S  Y   D…  …..GAA AAT ATC ATC TTT GGT GTT TCC TAT GAT…. …..GAA AAT ATC ATT GGT GTT TCC TAT GAT…. …E   N   I I G   V    S  Y   D…  Cl- TM1 TM2 NBD1 NBD2 R F508del • nejčastější mutace v české populaci ~70% • delece tří bází v exonu 10 • výpadek methioninu 508 v proteinu

  6. N VyšetřenímutaceF508del • Obecný primer (C) Normal specific primer(N) Mutation specific primer(M) TARGET SEQUENCE C M

  7. O/N O/M O/N O/M O/N O/M 1 2 1 2 1 2 Homozygot bez mutace Heterozygot přenašeč Homozygot s mutací VyšetřenímutaceF508del PCR reakce probíhá ve dvou zkumavkách: PCRMix 0obsahuje primer obecnýa „normální“ PCRMix 1 obsahuje primer obecný a „mutovaný“

  8. Pacient 1 2 3 DNA marker NK + + + P C R M i x 0 STS gen (P3,4) – kontrola průběhu PCR CFTR gen (P0,2) – obecný primer – primer specifický na sekvenci bez mutace + - + STS gen(P3,4) –kontrola průběhu PCR CFTR gen(P1,2) –obecný primer – primer specifický na sekvenci s mutací P C R M i x 1 VyšetřenímutaceF508del

  9. PCRprotokol-vyšetření mutaceΔF508 Detekce mutacezpůsobující cystickou fibrózu v CFTR genupomocí sekvenčně specifických primerů PCR Mix 0 / Mix 1: • Voda 8,5µl • Pufr 2,0µl • dNTP mix 4,0µl • Mg2+ (MgCl2) 2,0µl • Primery M0 / M1 1,2µl • DNA 2,0µl • Taq polymeráza 0,4 µl (na ledu)

More Related