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Au laboratoire de parasitologie ! La technique de filtration pour le dépistage de la dirofilariose

Au laboratoire de parasitologie ! La technique de filtration pour le dépistage de la dirofilariose. Dre Brigitte Guay, dmv, M.Sc. Professeur Collège Laflèche de Trois-Rivières. Introduction. Pourquoi faire un Difil-Test ? Pour aider au diagnostic de la dirofilariose Pour faire du dépistage

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Au laboratoire de parasitologie ! La technique de filtration pour le dépistage de la dirofilariose

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Presentation Transcript

  1. Au laboratoire de parasitologie!La technique de filtrationpour le dépistage de la dirofilariose Dre Brigitte Guay, dmv, M.Sc. Professeur Collège Laflèche de Trois-Rivières

  2. Introduction • Pourquoi faire un Difil-Test ? • Pour aider au diagnostic de la dirofilariose • Pour faire du dépistage • Pour vérifier le bon fonctionnement du programme de prévention contre le ver du cœur

  3. TECHNIQUE DE FILTRATION • Technique encore à privilégier au Québec en clinique vétérinaire pour le dépistage du ver du cœur. • La difficulté de cette technique réside dans la capacité du technicien à reconnaître correctement un microfilaire de Dirofilaria immitis. • Limites de la technique: • Ne détecte pas les infections amicrofilarémiques, aussi appelées infections occultes. • Limite humaine : la sensibilité diminue après l’examen de plus de 10 lames de suite.

  4. Filtration du sang pour la recherche de microfilaires (Difil-Test™): la technique en images 1. Matériel Échantillon sanguin dans un tube Vacutainer Béchers ou verres de carton Solution lysante lames lamelles Pince Colorant Seringue 10 ml Support pour filtre Boîte de filtres Aiguille 20G

  5. Filtration du sangLa technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.1 Préparer la seringue • Bien visser l’aiguille à la seringue

  6. Filtration du sangLa technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.2 Homogénéiser l’échantillon sanguin • Bien mélanger l’échantillon en basculant le tube à quelques reprises • Immédiatement avant le prélèvement avec la seringue et aiguille Tube avec anticoagulant (EDTA). Notez le bouchon couleur lavande.

  7. Filtration du sangLa technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.3 Prélever l’échantillon sanguin (1 ml) • Rétablir la pression dans le tube si nécessaire (ou, injecter 1 ml d’air) • Insérer l’aiguille au niveau de la zone centrale du bouchon • Tirer sur le piston 1 ml

  8. Filtration du sang La technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.4 Essuyer l’embout de la seringue Compresse de gaze, KimWipe ou morceau d’essuie-tout

  9. Filtration du sangLa technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.5 Prélever la solution lysante (~ 9 ml) On tire sur le piston pour aspirer la solution lysante (NE PAS POUSSER LE PISTON)

  10. Filtration du sangLa technique en images • 2. La préparation de l’échantillon • 2.6 Brasser le tout pour bien lyser les cellules sanguines 7. Centrifuger D’abord, ajouter de l’air (~ 1 ml) Basculer de 180° plusieurs fois (la bulle va d’un bout à l’autre de la seringue)

  11. 3 1 2 Le support a 3 parties Papier bleu séparateur Filtration du sangLa technique en images 3. L’installation du filtre Le filtre est pris avec une pince Disque de papier bulle pour maintenir les filtres en place

  12. Filtration du sangLa technique en images 3. L’installation du filtre (suite) • Insérer le filtre (surface luisante sur le dessus) • Placer le joint d’étanchéité sur le filtre • Bien visser

  13. Filtration du sangLa technique en images 4. Filtrer l’échantillon • Visser la seringue au support à filtre • Pousser le piston afin de filtrer l’échantillon • Le filtrat est rejeté dans un évier ou un bécher Bien vérifier au départ qu’il n’y a pas de fuites aux endroits indiqués par les flèches noires.

  14. Filtration du sangLa technique en images 5.Rincer avec de l’eau du robinet Aspirer l’eau en tirant le piston Séparer d’abord la seringue et le support à filtre Reconnecter la seringue et pousser le piston Recommencer l’étape 5 pour enlever le surplus de liquide, en poussant 2-3 ml d’air (facultatif).

  15. Filtration du sangLa technique en images 6.Transférer le filtre sur la lame Enlever le joint de caoutchouc Séparer d’abord la seringue et le support à filtre À l’aide de la pince, glisser le filtre, SANS LE RETOURNER, pour le transférer sur la lame

  16. Filtration du sangLa technique en images 7.Colorer et placer la lamelle b) Placer la lamelle a) Ajouter une goutte de colorant Essuyer le dessous de la lame si nécessaire c) S’assurer d’un bon contact lame-lamelle (le colorant s’étale sur toute la surface) d) Laisser agir 30 sec

  17. Filtration du sangLa technique en images 8.Parcourir la lamelle (filtre) au microscope La lame est prête à être examinée au microscope, au grandissement total de 100X.

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