Natalia Raquel Dolce Doctorado en el Área de Recursos Naturales.

1. CABBIO 2008 “Conservación del germoplasma para el mejoramiento de cultivos vegetales.” Natalia Raquel Dolce Doctorado en el Área de Recursos Naturales. Facultad de Ciencias Agrarias. UNNE.

2. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” Dirección de Tesis: Dra. Hebe Y. Rey Ing. Agr. Luis A. Mroginski Lugar de Trabajo: Laboratorio de Cultivo de Tejidos Vegetales. Instituto de Botánica del Nordeste (IBONE) Facultad de Ciencias Agrarias. UNNE.

3. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • El género Ilex pertenece a la familia Aquifoliaceae y comprende unas 600 especies distribuidas principalmente en las regiones tropicales y subtropicales del mundo. • Aproximadamente 220 especies son nativas de Sudamérica, de las cuales la que presenta mayor valor económico es Ilex paraguariensis (yerba mate). • Esta especie crece espontáneamente y es extensivamente cultivada en el NE de Argentina, E de Paraguay y SE de Brasil.

4. Ilex dumosa Ilex brevicuspis “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • En esta región también existen otras especies nativas del género casi simpáticas con I. paraguariensis, como ser I. brasiliensis, I. brevicuspis, I. dumosa e I. theezans. • La actual crisis generalizada de la biodiversidad ha transformado a estas especies en recursos fitogenéticos del cultivo de yerba mate. Todas las regiones de distribución de estas especies, particularmente el territorio brasilero (que es cuantitativamente más rico en especies de Ilex), están sufriendo un acelerado reemplazo de la pluvisilva subtropical por áreas agrícolas.

5. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • Por otra parte, a medida que mejoramos una especie obteniendo variedades “superiores”, su variabilidad natural es progresivamente reducida. • De lo expuesto anteriormente se desprende la necesidad de la creación y mantenimiento de bancos de germoplasma de yerba mate y especies afines, con el fin de preservar la variabilidad genética de las poblaciones así como para su uso en mejoramiento y en estudios básicos.

6. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • Los bancosex situ de germoplasma existentes consisten en colecciones a campo, debido a que las semillas de la mayoría de las especies tropicales y subtropicales del género Ilex contienen embriones rudimentarios y presentan bajo porcentaje de germinación. • Sumado a ello, las semillas de estas especies son muy sensibles al desecamiento, característica por la cual no pueden ser conservadas secas y frías tal como se conserva convencionalmente el germoplasma de la mayoría de las especies vegetales.

7. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • En estos casos la conservación in vitro de germoplasma (bajo condiciones de crecimiento mínimo o a la temperatura ultrabaja del nitrógeno líquido) se presenta como una valiosa alternativa. • En el IBONE, desde hace algunos años se viene trabajando en la conservación y crioconservación de germoplasma vegetal. Para el género Ilex, los únicos antecedentes referidos a la crioconservación de germoplasma fueron realizados en dicho Instituto.

8. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • Objetivos del trabajo: • Establecer procedimientos que permitan la conservación in vitro de germoplasma de especiesdel género Ilex, a mediano y largo plazo. • Estudiar la incidencia de diversos factores sobre la conservación y criopreservación de varios explantes (embriones cigóticos inmaduros, embriones somáticos, frutos, ápices, segmentos uninodales) de Ilex paraguariensis y especies afines.

9. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • Material vegetal: • Frutos (polidrupas) de Ilex brasiliensis, I. brevicuspis, I. dumosa, I. integerrima, I. paraguariensis, I. pseudoboxus, I. taubertiana e I. theezans provistos por la EEA INTA de Cerro Azul (Misiones, Argentina). • Otros explantes: embriones somáticos, segmentos uninodales y ápices caulinares provenientes de vástagos regenerados in vitro o de plantas mantenidas en invernadero.

10. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” Ilex brevicuspis 3 mm 3 mm Pirenos vanos Pirenos llenos Ilex dumosa 3 mm 3 mm Pirenos vanos Pirenos llenos

11. A C D B E F Estadios de desarrollo embrionario en frutos maduros de Ilex dumosa: A- Globular; B- Corazón; C- Post-corazón; D- Torpedo; E, F- Cotiledonar.

12. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” I. brevicuspis I. dumosa I. paraguariensis • Globular: • Corazón: • Post-corazón: • Torpedo: • Cotiledonar: 0 % 24,7 % 62,5 % 10,9 % 1,9 % 6,7 % 43,2 % 31,6 % 11,2 % 7,2 % 2,6 % 70,2 % 23,3 % 2,6 % 0,9 %

13. “Conservación in vitro de germoplasma de especies del género Ilex (Aquifoliaceae).” • Problemas abordados: • Optimizar la metodología de cultivo in vitro de embriones, ápices y segmentos nodales. • Determinar el grado de sensibilidad a la deshidratación de las semillas y la tolerancia a bajas temperaturas de almacenamiento. • Estudiar la factibilidad de conservar y crioconservar diferentes explantes de estas especies.

14. embrión Optimización de la metodología de cultivo in vitro de embriones.

15. Cultivo de embriones y pirenos partidos de Ilex pseudoboxus en MS/4 (3% sac) + 0,1 mg/L de Zea 30 días oscuridad + 60 días luz a 27ºC

16. Cultivo de pirenos partidos de Ilex theezans en ¼ MS 30 días oscuridad + 60 días luz a 27ºC

17. “Conservación” in vitro de pirenos enteros de Ilex pseudoboxus a 5ºC MS/4 60 días 5ºC en oscuridad + 30 días 27ºC en luz MS/4 180 días 5ºC en oscuridad + 30 días 27ºC en luz

18. “Conservación” in vitro de pirenos enteros de Ilex pseudoboxus 27ºC MS/4 120 días luz a 27ºC MS/4 90 días oscuridad + 30 días luz a 27ºC

19. Pirenos partidos Pirenos enteros 80 % germinación 73 % germinación Cultivo de pirenos de Ilex pseudoboxus en germinadores estériles 60 días oscuridad + 60 días luz a 27º C

20. Conservación de pirenos: Tolerancia a la deshidratación y a las bajas temperaturas • Los pirenos fueron deshidratados con soluciones salinas saturadas • de distinta presión de vapor relativa (H.R.) y mantenidos a 27ºC, 4ºC • (-20ºC y -70ºC): • 27ºC 4ºC • NaCl (H.R. 75%): 11,3 % 15,1 % • MgNO3 (H.R. 59%): 9,8 % 11,3 % • MgCl2 (H.R. 33%): 7,7 % 9,4 % • CH3COOK (H.R. 23%): 5,7 % 6,6 % • LiCl (H.R. 11%): 2,8 % 3,4 % • NaOH (H.R. 7%): 2,6 % 3 %

21. Crioconservación de pirenos empleando la técnica de desecación Los pirenos fueron deshidratados en cámaras herméticamente cerradas conteniendo Sílicagel durante 0 – 15 h e inmersos directamente en NL (enfriamiento rápido).

22. Cultivo in vitro de ápices y segmentos nodales. Uso de técnicas de crioconservación. Es necesario optimizar los protocolos de establecimiento y brotación de ápices y segmentos nodales para su uso en la conservación a corto, mediano y largo plazo. Crioconservación Se emplearon las técnicas de Vitrificación y Encapsulaciòn-Deshidratación con ápices caulinares de Ilex paraguariensis provenientes de plantas mantenidas en invernadero, sin obtener sobrevivencia luego de la exposición al NL.

23. MUCHAS GRACIAS!!