DAPHTOXKIT F MAGNA Postupak

1. DAPHTOXKIT F MAGNA Postupak

2. 1 • STANDARDNA PRIPREMA – SLATKA VODA • - ODMJERNA TIKVICA (2 lit) • - BOČICA SA OTOPINOM • KONCENTRIRANIH SOLI • DESTILIRANA (ili deionizirana voda)

3. 2 ULITI SADRŽAJ 4 BOČICE KOJE SADRŽE OTOPINU KONCENTRIRANIH SOLI U +- 1 LITRU DESTILIRANE VODE U ODMJERNOJ TIKVICI OD 2 LITRE.

4. 3 DOPUNITI TIKVICU DO OZNAKE “2 LIT” I ZRAČITI NAJMANJE 15 MINUTA

5. 4 PRIPREMA “DAPHNIA EPHIPPIA” ODSTRANITI ALUMINIJSKU FOLIJU SA EPRUVETE KOJA SADRŽI JAJAŠCA ORGANIZMA.

6. 5 ISPRAZNITI SADRŽAJ EPRUVETE U MIKROSITO

7. 6 PROVJERITI DA SU SVA JAJAŠCA PRENESENA U SITO

8. 7 DOBRO ISPRATI JAJAŠCA OBIČNOM VODOM (IZ SLAVINE)

9. 8 PREMJESTITI JAJAŠCA U PETRI ZDJELICU SA SLATKOM VODOM

10. 9 POSTAVITI PETRI ZDJELICU U INKUBATOR NA 72 SATA PRI TEMPERATURI OD 20-22oC I POD KONSTANTNIM OSVJETLJENJEM OD 6000 LUX

11. 10 PRIPREMA OTOPINA Npr. TEST NA OTPADNOJ VODI; 5 UZORAKA (C1-C5) + JEDAN KONTROLNI POSTUPAK

12. 11 ULITI 50 ml STANDARDNE (SLATKE VODE) U TIKVICE C2,C3,C4 I C5 50 ml

13. 12 ULITI UZORAK OTPADNE TEKUĆINE U TIKVICU C1 DO OZNAKE 100ml

14. 13 PRELITI 50 ml OTPADNE TEKUĆINE IZ TIKVICE C1 U MENZURU

15. 14 PRELITI 50 ml OTPADNE TEKUĆINE IZ MENZURE U TIKVICU C2 I DOBRO PROMUĆKATI.

16. 15 50 ml 50 ml 50 ml PONOVITI PRETHODNI POSTUPAK RAZRJEĐIVANJA SA OSTALIM TIKVICAMA (npr. 50ml iz C2 u C3 itd.)

17. 16 PUNJENJE TEST PLOČE ULITI 10 ml VODE (SLATKA VODA) U SVAKI UTOR KONTROLNOG REDA NA PLOČI Control row

18. 17 Test rows ULITI 10 ml KONCENTRIRANE OTPADNE TEKUĆINE U SVAKI UTOR PRIPADAJUĆEG RETKA OD C5 DO C1

19. 18 NAKON 72 DO 80 SATI INKUBACIJE PROVJERITI STUPANJ IZLIJEGANJA ORGANIZAMA

20. 19 POTREBNO JE MINIMALNO 120 TEK IZLEGNUTIH DAPHNIA DA BI SE PROVEO JEDAN TEST I ONE NE BI SMJELE BITI STARIJE OD 24 SATA

21. 20 DVOSATNA PRED-HRANIDBA TESTNIH ORGANIZAMA UZETI JEDNU EPRUVETU SA SPIRULINOM I NAPUNITI JE SA VODOM (SLATKA VODA)

22. 21 DOBRO PROTRESTI EPRUVETU SA SMJESOM SPIRULINE I IZLITI JE U PETRI ZDJELICU SA TEK IZLEGNUTIM DAPHNIAMA I LAGANO PROTRESTI DA SE RASPOREDI PO CJELOJ ZJDELICI

23. 22 • PRIJENOS DAPHNIA U UTORE NA TEST PLOČI • - TEST PLOČA SA UTORIMA • “LIGHT BOX” SA PROZIRNIM STALKOM • - MIKROPIPETA

24. 23 PRENIJETI NAJMANJE 20 (aktivnih) DAPHNIA U UTOR ZA ISPIRANJE NA TEST PLOČI U KONTROLNOM RETKU.

25. 24 Rinsing cups PRENIJETI 20 DAPHNIA (minimalno) U SVE OSTALE UTORE ZA ISPIRANJE S CILJEM POVEĆANJA KONCENTRACIJE OTPADNE TVARI

26. 25 Test row PRENIJETI TOČNO 5DAPHNIA IZ SVAKOG UTORA ZA ISPIRANJE U 4 UTORA PRIPADAJUĆEG RETKA

27. 26 DA BI SE IZBJEGLO POVRŠINSKO PLUTANJE DAPHNIA ZA VRIJEME PRIJENOSA POŽELJNO JE UMETNUTI VRH MIKROPIPETE U TEKUĆINU I NE ISPUŠTATI ORGANIZME NA POVRŠINU TEKUĆINE

28. 27 POSTAVITI KOMAD PARAFILMA NA TEST PLOČU, ZATIM POSTAVITI POKLOPAC I DOBRO GA PRIČVRSTITI

29. 28 INKUBACIJA TEST PLOČE INKUBIRATI TEST PLOČU NA 20 +- 2oC U MRAKU

30. 29 OČITANJE REZULTATA NAKON 24 I 48 SATI INKUBACIJE POSTAVITI TEST PLOČU NA OSVJETLJENI STOL I BILJEŽITI BROJ UGINULIH I NEPOKRETNIH DAPHNIA

31. 30 DAPHNIE KOJE NE MOGU PLIVATI NAKON LAGANOG MUĆKANJA TEKUĆINE OKO 15 SEKUNDI SMATRAJU SE NEPOKRETNIM (čak i ako mogu još uvijek micati ticalima)

32. 31 -ZABILJEŽITI REZULTATE NA OBRAZAC -IZRAČUNATI UKUPAN BROJ UGINULIH ILI NEPOKRETNIH DAPHNIA ZA SVAKU KONCENTRACIJU OTPADNE TEKUĆINE -IZRAČUNATI PROSJEČAN, OČEKIVANI REZULTAT I REZULTAT U POSTOCIMA.