Técnicas de microscopia de contraste

1. Contraste : interações luz e matéria Técnicas de microscopia de contraste • Fluorescência; • Luz polarizada; • Contraste de fase; • Campo escuro; • Contraste interferencial. Em amostras que dão contraste de até 3%, estas técnicas melhoram o contraste, permitindo a visualização pelo olho humano.

2. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Transmissão = luz + fluorescência – (absorção + refração + reflexão) fluorescência refração absorção LUZ reflexão

3. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Espectro de luz visível  (quanto maior o l, menor a energia)      

4. i AR 1ª interação ao entrar no tecido TECIDO r 2ª interação: dentro do tecido i AR AR e/ou = menor intensidade de luz transmitida TECIDO TECIDO

5. Contraste : interações luz e matéria Quais interações resultam nesta imagem?

6. Propriedades fundamentais da luz - intensidade; - freqüência; - coerência; - polarização. Onda Vetor campo elétrico E l 1 5 y 1,5 2 4 2 4 x 3 3 l/4 l/4 l/4 l/4 • Polarização é a natureza vetorial da luz

7. Contraste : interações luz e matéria • Contraste: tipos de amostra 1) Amplitude: alteram a intensidade da luz transmitida. Amostras transparentes coradas causam o mesmo efeito. 2) Fase: não absorvem luz, mas causam mudança de fase nos comprimentos de onda que a atravessam. Amostra transparente Amostra tipo amplitude Amostra tipo fase Amostra tipo misto (maioria)

8. Resultante Onda A Sem retardo de fase: amplitude aumentada Onda B Interferência construtiva Resultante Onda A Retardo de fase de 90º: amplitude reduzida Interferência construtiva Onda B Resultante Onda A Retardo de fase de 180º: amplitude zero Onda B Interferência destrutiva

9. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Tipos de reflexão regular difusa

10. Contraste : interações luz e matéria • Reações com a luz • reflexão regular; • transmissão; • absorção

11. Contraste : interações luz e matéria • Reações com a luz • reflexão regular; • pouca transmissão; • absorção.

12. Contraste : interações luz e matéria • Reações com a luz • reflexão regular; • transmissão; • absorção.

13. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Tipos de reflexão Regular Difusa

14. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Transmissão

15. Contraste : interações luz e matéria Reflexão 4 1 5 2 3 6

16. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Reflexão e Transmissão

17. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz Na face oclusal

18. Contraste : interações luz e matéria • Reações com a luz • Fluorescência • Aminoácidos fluorescentes • - Tirosina; - Fenilalanina; - Triptofano. • lexcit 275 nm 260 nm 295 nm • lemiss 304 nm 282 nm 353 nm • Compostos aromáticos fluorescentes • porfirinas (sangue, pigmentos naturais, bactérias). • lexcit 390-440 nm • lemiss 615 nm e 675 nm

19. Contraste : interações luz e matéria Fluorescências dos tecidos dentaisduros excit ótima emiss máx cromóforo Dentina# 380 nm 440 nm ? Esmalte# 280 nm 420 nm ditirosina Cálculo dental* 407 nm 604 e 656 nm hematoporfirina dicátion 416 nm 617 e 669 nm 431 nm 635 e 683 nm # Zijp, Optical propeties of hard dentasl tissues, Thesis, 2001; * Reis et al., Applied Spectr. 2001;

20. Contraste : interações luz e matéria Fluorescências dos tecidos dentaisduros Observar comportamento Gaussiano das curvas de fluorescência

21. Contraste : interações luz e matéria Reações com a luz  Fluorescência