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HnRNP A2/B1 在非小细胞肺癌（ NSCLC ）中的表达及其与 DNA 修复酶 MGMT 、 OGG1 、 APEX 、 DNA-PKcs 和 Ku 之间作用关系的初步研究

HnRNP A2/B1 在非小细胞肺癌（ NSCLC ）中的表达及其与 DNA 修复酶 MGMT 、 OGG1 、 APEX 、 DNA-PKcs 和 Ku 之间作用关系的初步研究. 石园 陈颖 侯英勇 季春华 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山 作者单位：复旦大学附属中山医院病理科 ( 石园 侯英勇 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山 ); 复旦大学附属肿瘤医院病理科 ( 陈颖 ); 上海市第五人民医院 ( 季春华 ) 第一作者 : 石园 通讯作者：谭云山. 研究背景. 肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一位，但其发病机制尚未阐明

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HnRNP A2/B1 在非小细胞肺癌（ NSCLC ）中的表达及其与 DNA 修复酶 MGMT 、 OGG1 、 APEX 、 DNA-PKcs 和 Ku 之间作用关系的初步研究

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Presentation Transcript

  1. HnRNP A2/B1在非小细胞肺癌（NSCLC）中的表达及其与DNA修复酶MGMT、OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku之间作用关系的初步研究 石园 陈颖 侯英勇 季春华 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山 作者单位：复旦大学附属中山医院病理科(石园 侯英勇 胡沁 周杨 宿杰阿克苏 谭云山); 复旦大学附属肿瘤医院病理科(陈颖); 上海市第五人民医院(季春华) 第一作者:石园 通讯作者：谭云山

  2. 研究背景 • 肺癌的发病率和死亡率目前已经排在各种恶性肿瘤的第一位，但其发病机制尚未阐明 • 文献报道核不均一核糖核蛋白A2/B1（hnRNP A2/B1）在NSCLC中表达上调。hnRNP A2/B1一种重要的RNA连接蛋白，负责基因转录后调控,由hnRNP A2和hnRNP B1组成 ，广泛低量存在于正常肺组织中，参与RNA的拼接、Pre-mRNA的成熟和降解 ，mRNA由胞核到胞质的转运及转录后调节，细胞有丝分裂、成熟、分化及凋亡的调节 • 目前已知DNA修复酶MGMT、APEX、OGG1、DNA-PKcs和Ku在肺癌组织中的表达与正常肺组织有明显差别，均与肺癌的发生相关 • hnRNP A2/B1是否对DNA修复酶转录后调控？

  3. 材料与方法 • 免疫组织化学：50例NSCLC石蜡标本（包括癌及距离癌5cm以上的 正常肺组织）；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体(1:1000,Sigma)及鼠抗人MGMT单克隆抗体（1:100，Abcam） ；评定标准：胞核阳性，以阳性细胞数量及阳性强度为标准进行半定量评分 • Western blot：5例鳞癌和5例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；一抗:鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体 • 荧光实时定量PCR(real-time PCR):11例鳞癌和11例腺癌的癌组织及对应正常肺组织新鲜标本；2－△Ct法检测目的基因hnRNP A2/B1 及MGMT mRNA的相对表达量 • 免疫共沉淀结合RT-PCR：人肺鳞癌细胞株 （HTB-182 ），裂解后加入鼠抗人hnRNP A2/B1单克隆抗体共沉淀，从产物中提取RNA进行RT-PCR检测（目的基因MGMT、OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku）

  4. 结 果 • HnRNP A2/B1免疫组织化学：NSCLC癌组织中的阳性率及平均表达得分（100％，5.3±0.9）显著高于正常肺组织（32％，2.2±0.7）（p<0.01）；在III-IV期癌组织中的平均表达得分（5.7±0.7）略高于I-II期（5.0±0.9）（p<0.05），其表达与年龄、性别、肿瘤类型及吸烟史无明显相关性 鳞癌 （Envision×400） 正常 （Envision×100） 腺癌 （Envision×400） 正常（Envision×100）

  5. HnRNP A2/B1 Westen blot：NSCLC癌组织平均灰度比值(1.4±0.5)明显高于正常肺组织(0.7±0.2)（p<0.01） hnRNP A2/B1及内参的western blot结果：1、3为同一鳞癌患者的癌组织及正常组织的条带；2、4为同一腺癌患者的癌组织及正常组织的条带

  6. HnRNP A2/B1荧光实时定量PCR: hnRNP A2/B1 mRNA在NSCLC癌组织中的平均表达量37.4(15.6～82.6)明显高于正常肺组织17.6(7.8～27.8)（p<0.01）

  7. 免疫共沉淀结合RT-PCR结果： 基因扩增电泳条带图（1-2为MGMT扩增产物，3-10分别为OGG1、APEX、DNA-PKcs和Ku，均未显示明显条带） 提示hnRNP A2/B1蛋白与MGMT mRNA相结合

  8. MGMT免疫组织化学：NSCLC癌组织阳性率及平均表达得分(32％， 2.2±0.8)明显低于正常肺组织（78％，4.1±1.2)（p<0.01） 鳞癌 （Envision×400） 正常 （Envision×400） 腺癌（Envision×400） 正常 （Envision×400）

  9. MGMT荧光实时定量PCR: MGMT mRNA在NSCLC癌组织中的平均表达量1.8(0.6～3.1)明显低于正常肺组织9.8(6.8～18.3)（p<0.01）

  10. 讨 论 hnRNP A2/B1蛋白及mRNA在NSCLC癌组织中高表达 MGMT蛋白及mRNA在NSCLC癌组织中低表达 + hnRNP A2/B1蛋白结合MGMT mRNA hnRNP A2/B1对MGMT可能存在转录后调控作用 下调MGMT mRNA及蛋白的表达 削弱细胞DNA损伤修复能力 参与非小细胞肺癌发生

  11. 谢谢！

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