LES BONNES PRATIQUES DE LABORATOIRE

1. LES BONNES PRATIQUES DE LABORATOIRE

2. Les objectifs pédagogiques de l’UE • La Licence de Biologie-Biochimie est une formation qui s’appuie fortement sur l’expérimentation. • Quelle que soit la spécialisation : la connaissance et la maîtrise des BPL sont indispensables. • Celles-ci nécessitent : • 1) connaître les risques liés à la manipulation des produits chimiques utilisés, • 2) connaître et de mettre en place les consignes d’utilisation des produits chimiques • 3) bien utiliser les équipements de mesure disponibles (verrerie, pipettes, balances …), • 4) maîtriser les notions et les calculs élémentaires de concentration • 5) maîtriser la notion de solution tampon, • 6) savoir écrire et de bien suivre une procédure expérimentale incluant les consignes de préparation des solutions utilisées et d’hygiène et de sécurité, • 7) d’être sensibilisé à l’intérêt de la répétitivité des résultats, • 8) d’être sensibilisé à l’intérêt d’un rapport d’activités propres et détaillé (cahier de manipulation).

3. Les objectifs pédagogiques de l’UE • Objectif = sensibilisation des étudiants aux BPL, par le biais d’une série de séances pratiques basés sur des approches théorique (exercices) et pratique (procédures expérimentales à mettre en place par l’étudiant et à exécuter correctement). • La complexité des consignes d’expérimentation est croissante au cours des deux semaines de formation. • EVALUATION • Les étudiants seront évalués en contrôles continus par le biais : • d’exercices réalisés au cours de l’UE, • Suivi de l’étudiant durant les 2 semaines de BPL • d’évaluations du cahier de manipulation, • d’un contrôle final (théorique).

4. LE CAHIER DE MANIPULATION OU DE LABORATOIRE Concrètement, pas de feuille mobile, pages numérotées et datées, avec double signature, où sont consignés au fur et à mesure hypothèses, démarches scientifiques, résultats d'expériences et tout élément utile au projet. C'est un outil qui a un intérêt scientifique et méthodologique = aide-mémoire utile pour la progression du projet = valeur de preuve juridique garantissant authenticité, originalité et paternité des résultats en cas de litige. = élément de traçabilité des connaissances dans les laboratoires, un moyen de capitalisation et de transmission du patrimoine intellectuel, = outil de sensibilisation à la propriété intellectuelle.

5. ETIQUETAGE REGLEMENTAIRE Danger le plus important CORROSIF Phrases R de risque Phrases S « Conseils de prudence »

6. LA FICHE DE DONNEES DE SECURITE Fichier pdf joint

7. LES DANGERS LIES A LA MANIPULATION DES PRODUITS CHIMIQUES • Trois types de dangers • Découlant des propriétés toxicologiques du produit sur l’Homme • Découlant des propriétés physico-chimiques du produit • Découlant des propriétés écotoxiques du produit sur la faune et la flore • (environnement)

8. LES DANGERS TOXICOLOGIQUES Toxique T Très Toxique T+ Nocif Xn Irritant Xi Danger pour la santé Mode de pénétration : inhalation, contact cutané ou ingestion Prévention / inhalation : local ventilé, manipulation sous sorbonne, masque (pesée) Prévention / contact cutané : EPI (gants, lunettes, écran facial, blouse ..) Prévention / intoxication par ingestion : idem avec respect des BPL (pipetage …)

9. LES DANGERS TOXICOLOGIQUES • 1. Substances toxiques (T+ et T) et nocives (Xn) • peuvent entraîner la mort ou des maladies • Intoxication aigue / produits très toxiques ou dose absorbée importante • Intoxication chronique / pénétration répétée dans l’organisme de faibles doses de certains produits toxiques ou nocifs • 2. Substances cancérogènes, mutagènes ou toxiques pour la reproduction • Pas de pictogrammes spécifiques de ces produits marqués T ou Xn • Peuvent entraîner le cancer ou augmenter leur fréquence • Peuvent produire des défauts génétiques héréditaires ou augmenter leur fréquence • Peuvent produire ou augmenter la fréquence d’effets indésirables non hétéditaires dans la progéniture ou porter atteinte aux capacités reproductrices • Classés en catégorie 1 (effets avérés), 2 (effets fortement suspectés) ou 3 (effets possibles mais données actuellement insuffisantes) • Prévention : très encadrée. Substitution si possible par un produit moins dangereux. Eviter leur manipulation (pesée, pipetage ..). Manipulation dans un système clos, EPI, déchets éliminés spécifiquement. • 3. Substances irritantes (Xi) • Contact immédiat, répété ou prolongé  réaction inflammable • 4. Substances corrosives (C) • Contact avec tissus vivants  action destructrice sur ces derniers • Prévention : douche de sécurité obligatoire et laveur oculaire à proximité

10. LES DANGERS / PROPRIETES PHYSICO-CHIMIQUES • 1. Substances explosives (E)) • Explosion possible pendant la manipulation sous l’effet d’un choc, d’un frottement ou d’une élévation de température • Prévention : utilisation de la quantité minimale, sous sorbonne, écran pare-éclats, écran facial. • 2. Substances extrêmement inflammables (F+), facilement inflammables (F) et inflammables • Risque d’inflammabilité évalué par trois caractéristiques : • . Point éclair : température minimale à laquelle un liquide émet un gaz inflammable en présence d’une source d’inflammation. • . Température d’auto-inflammation : température minimale pour laquelle un mélange de vapeurs dans l’air s’enflamme spontanément • . Domaine d’explosivité : domaine de concentration de vapeurs dans l’air dans lequel il peut y avoir combustion ou explosion • Prévention : • suppression des sources d’inflammation (ne pas fumer, limiter l’emploi des appareils à flamme nue, ne pas déposer ces produits à proximité d’une source de chaleur, installation électrique sans étincelle (réfrigérateur …)) • suppression, isolement du combustible ou dilution dans l’air (privilégié la substitution par un produit non inflammable, stockage dans un local et enceinte ventilés ad-hoc, réduire les stocks) • Suppression du comburant : Inertage à l’azote par exemple pour les substances auto- inflammables au contact de l’air à T°C ambiante. • 3. Substances comburantes (O) • Souvent une source d’oxygène  favoriser ou activer la combustion d'une substance combustibleincendie ou explosion par contact et réaction avec un produit combustible.

11. LES DANGERS / PROPRIETES ECOTOXIQUES Substances dangereuses pour l’environnement (N) Produits qui peuvent présenter un risque immédiat ou différé pour une ou plusieurs composantes de l'environnement (dommages à la faune, à la flore, pollution des eaux naturelles et de l'air, appauvrissement de la couche d’ozone ..). Fort potentiel de bioaccumulation ou de persistance dans l’environnement (faible potentiel de biodégradation) Élimination des déchets très encadrée.

12. NOTIONS PRIMAIRES Nombre de moles (n) & Nombre d’Avogadro (N) Masse moléculaire et masse molaire (M) Masse volumique (mv) Densité d'un liquide (d) Pourcentage massique (%)

13. Qu'est-ce qu'une mole ? La mole peut se définir par exemple comme étant le nombre d'atomes de carbone présents dans 12 grammes de carbone 12C. Ce nombre d'atomes est égal à N, la constante d'Avogadro. La mole se note : mol. Nombre ou constante d'Avogadro :Le nombre d'Avogadro représente le nombre d'entités élémentaires (atomes, ions, molécules...) contenues dans une mole de matière. Le nombre d'Avogadro se note : N. Ce nombre N a comme valeur : 6,023 1023 La masse molaire d'une molécule est la masse qui contient 6,023.1023 exemplaires de cette molécule. La masse molaire s'exprime en g/mol. La masse moléculaire est la somme des masses atomiques des différents atomes constituant une molécule.

14. Nombre de moles :Lorsque l'on connait la masse molaire, il est possible de calculer le nombre de moles d'une molécule donnée qui est contenu dans une certaine masse de la dite molécule. Dans le cas d'un composé solide : n = m/M • Dans le cas d'un composé liquide : • Il est nécessaire de connaître sa masse volumique et sa densité : • - La masse volumique (notée mv) s'exprime en g/l. • la densité d'un liquide(notée d) représente le rapport entre la masse volumique du liquide et la masse volumique de l'eau, dans les mêmes conditions de température et de pression. (pas d’unité)

15. Concentration molaire ou molarité :La concentration molaire est le nombre de moles d'un composé par unité de volume  mol/l ou M ("molaire"). Autres expressions de la concentration d'une substance : La molalité : La molalité correspond à la quantité de soluté contenue dans 1000 grammes de solvant. (mol/kg). Le pourcentage massique (%) : Le pourcentage d'une solution exprime la masse d'un composé qui est contenue dans 100 grammes de solution.

16. Exercices d’applications BPL-1. Déterminer la masse (g) d’une mole des substances suivantes (masse molaire) A) D-glucose (C6H12O6) B) glycine (C2H5O2N) C) glutamine (C5H10O3N2) BPL-2. Déterminer la concentration molaire (M) du glucose dans les solutions suivantes A) 50 nmoles dans 100 mL d’eau B) 2 moles dans 3 L d’eau C) 155 g dans 1 L d’eau BPL-3. Pour chacune des solutions précédentes, calculer la concentration en glucose en % (p/v) BPL-4. Quelle est la masse de saccharose à peser afin de préparer 3 mL (volume final) d'une solution aqueuse de saccharose de concentration molaire 0,7 M ? BPL-5. Déterminer la concentration en ppm des solutions suivantes Solution A : 4 mg de glycine dissous dans 250 mL d’eau Solution B : 2 mL d’une solution de glycine 0.08M complétée à 250 mL avec de l’eau BPL-6. Déterminer le volume d’eau qu’il faut ajouter à 117 mL d’une solution de saccharose 0,5 M pour avoir une solution dont la concentration finale est de 8% (p/p : pourcentage massique). BPL-7. L'acide nitrique présente une masse moléculaire de 63. A) Calculer la concentration molaire d'une solution commerciale concentrée d'acide nitrique à 90 %, et qui présente une densité de 1,482. B) Quel est le volume de cette solution commerciale concentrée à prélever afin de préparer un litre d'acide nitrique de concentration 1 M ? C) Quel est le volume de cette solution commerciale concentrée à prélever afin de préparer 15 ml d'acide nitrique de concentration 0,1 M ?