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La Spermatogenesi

ISOLAMENTO DI UN NUOVO GENE ( Tangerina ) ESPRESSO NEL TESTICOLO DI RATTO: LOCALIZZAZIONE SPAZIALE E TEMPORALE. La Spermatogenesi. Fase Proliferativa o Spermatogoniale. Meiosi. Spermioistogenesi. Organizzazione del testicolo nei vertebrati. Ampollare (Anamni). Cistica (Anfibi Anuri).

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La Spermatogenesi

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Presentation Transcript

  1. ISOLAMENTO DI UN NUOVO GENE (Tangerina) ESPRESSO NEL TESTICOLO DI RATTO: LOCALIZZAZIONE SPAZIALE E TEMPORALE

  2. La Spermatogenesi • Fase Proliferativa o Spermatogoniale • Meiosi • Spermioistogenesi

  3. Organizzazione del testicolo nei vertebrati • Ampollare (Anamni) • Cistica (Anfibi Anuri) • Tubulare (Rettili, Mammiferi, Uccelli)

  4. Organizzazione ampollare

  5. Organizzazione cistica

  6. Organizzazione tubulare

  7. Studio della spermatogenesi ANFIBI MAMMIFERI RETTILI Nuovi markers dell’attività testicolare

  8. Prima evidenza della presenza dei recettori Mel1 e H9 per la melatonina nel testicolo di ratto adulto.

  9. 88% di omologia tra la sequenza del prodotto della PCR ottenuto dal cDNA di testicolo di ratto e la sequenza dell’mRNA della Tangerina A (tang-A) di topo

  10. Scopo degli esperimenti • Indagare la presenza della tangerina nel testicolo di ratti in età prepuberale e adulta e studiarne il profilo di espressione

  11. Tangerina • Mus musculus Tre isoforme dovute a splicing alterativo • tang-A di5705nt • tang-B di 3179nt • tang-C di 2834nt

  12. Splicing alternativo 5’-UTR Sequenza codificante 3’-UTR 5’- -3’ tang-A 1349nt 2526nt 5’- -3’ tang-B 1349nt 2860nt 5’- -3’ tang-C

  13. Analisi della sequenza amminoacidica predetta dalla sequenza nucleotidica di tang-A • Analisi incrociata con due diversi software (DAS e TMpred) per indagare sull’eventuale presenza di domini transmembrana

  14. Analisi della sequenza amminoacidica predetta dalla sequenza nucleotidica di tang-A • Rappresentazione lineare computerizzata della proteina

  15. 2 settimane 1 mese 6 mesi 12 mesi 28 S 18 S

  16. Localizzazione del gene Tangerina sul braccio lungo del cromosoma 1 di ratto

  17. Oligonucleotidi per PCR T.M. 62°C LUNGH. 21cb • TangA(1): 5’-caaagaacacttggacccaag-3’ • TangA(2): 5’-cacttgtgccttattcaggctg-3’ tang-A 460cb T.M. 62°C LUNGH. 22cb tang-B • TangBC(1):5’-cgctcaggttccacttcga-3’ • TangBC(2): 5’-gtgatgcagacaccacggtag-3’ 700cb T.M. 62°C LUNGH. 19cb T.M. 61,5°C LUNGH. 21cb tang-C 450cb

  18. 2 SETTIMANE 12 MESI 1 MESE 6 MESI tang-A 460 cb tang-B 700 cb 450 cb tang-C GAPDH 500 cb Analisi dei prodotti di RT-PCR nel testicolo di ratto agli stadi di sviluppo presi in esame

  19. 2 settimane 3 mesi 12 mesi 6 mesi 460cb GAPDH 460cb tang-A Ibridazione dei prodotti di PCR ottenuti con gli oligo per tang-A e GAPDH con cDNA marcato di tang-A e GAPDH

  20. 2 settimane 12 mesi 6 mesi 3 mesi 700cb Ibridazione dei prodotti di PCR ottenuti con gli oligo per tang-C e GAPDH con cDNA marcato di tang-C e GAPDH 460cb GAPDH 700cb 460cb tang-C

  21. Ibridazione insitu con cRNA antisensodi tang-C su sezioni di testicolo di ratto adulto

  22. Conclusioni • Prima evidenza dei trascritti della Tangerina nel testicolo di ratto • Presenza delle isoforme tang-A e tang-C e assenza di tang-B • Andamento crescente dei livelli di espressione di tang-A durante lo sviluppo mentre restano costanti quelli di tang-C • Localizzazione cellulare degli mRNA della Tangerina a livello dei spermatociti e dei spermatidi

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