INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI NEGLI ADENOCARCINOMI DUTTALI E NEI TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS

1. UNIVERSITÀ DI VERONA INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI NEGLI ADENOCARCINOMI DUTTALI E NEI TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS D Segala, S Bersani, V Zenti, S Beghelli, S Gobbo, S Barbi, P S Moore, G Turri, M Brunelli, P Capelli, G Martignoni, F Menestrina, A Scarpa

2. INTRODUZIONE L’ INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI (MSI) È DOVUTA ALL’ALTERATA FUNZIONE DEI GENI DEL MISMATCH REPAIR (MLH1, MSH2, MSH6). NEL TRATTO GASTROENTERICOMSI ÈSTATA DESCRITTA DAPPRIMA NEL CARCINOMA EREDITARIO DEL COLON NON ASSOCIATO A SINDROME POLIPOSICA FAMILIARE (HNPCC) (1) E SUCCESSIVAMENTE NEL CARCINOMA GASTRICO. IN ENRAMBE LE CONDIZIONI SEMBRA AVERE VALORE PROGNOSTICO POSITIVO (2)(3). (1)Aaltonen LA, Peltomaki P, Leach FS, Sistonen P, Pylkkanen L, Mecklin JP, et al. Clues to the pathogenesis of familial colorectal cancer. Science 1993;260:812–6. (2)Samowitz WS, Curtin K, Ma KN, Schaffer D, Coleman LW, Leppert M, et al. Microsatellite instability in sporadic colon cancer is associated with an improved prognosis at the population level. Cancer Epidemiol Biomarkers Prev 2001;10:917–23 (3) Beghelli S, de Manzoni G, Barbi S, Tomezzoli A, Roviello F, Di Gregorio C, et al. Microsatellite instability in gastric cancer is associated with better prognosis in only stage II cancers. Surgery 2006;139(3):347-56.

3. CARCINOMI COLORETTALI N N MSI+ MSI- T T N hMHL1 hMSH2 18qLOH T hMSH6 ALTERAZIONE

4. TUMORI DEL PANCREAS MSI SEMBRA ESSERE PRESENTE CON BASSA FREQUENZA NELL’ADENOCARCINOMA DUTTALE (1). MSIÈ STATA INOLTRE RISCONTRATA IN UN NUOVO ISTOTIPO RECENTEMENTE DESCRITTO, IL CARCINOMA MIDOLLAREDEL PANCREAS, IPOTIZZANDO LA SUA CORRELAZIONE CON HNPCC (2). NEI TUMORI ENDOCRINIÈDESCRITTA IPERMETILAZIONE DI MLH1 E MSI: TALI ALTERAZIONI SAREBBERO CORRELATE ALLA RIDUZIONE DEL RISCHIO DI RECIDIVA (3). (1)Yamamoto H, Itoh F, Nakamura H, Fukushima H, Sasaki S, et al. Genetic and clinical features of human pancreatic ductal adenocarcinomas with widespread microsatellite instability. Cancer Res 2001;61:3139–44. (2) Wilenz RE, Goggins M, Redson M, Marcus VA, Volkan Adsay N, et al. Genetic, immunohistochemical, and clinical features of medullary carcinoma of the pancreas: A newly described and characterized entity. Am J Pathol. 2000 May;156(5):1641-51. (3) House MG, Herman JG, Guo MZ, Hooker CM, Schulick RD, et al. Prognostic value of hMLH1 methylation and microsatellite instability in pancreatic endocrine neoplasms. Surgery 2003 Dec;134(6):902-8

5. INTRODUZIONE CON IL NOSTRO STUDIO VOGLIAMO ANALIZZARE L’INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI NELL’ISTOTIPO PREVALENTE DEI TUMORI DEL PANCREAS, L’ADENOCARCINOMA DUTTALE, E NELLE NEOPLASIE ENDOCRINE DEL PANCREAS.

6. MATERIALI E METODI • ARCHIVIO DIPARTIMENTO DI PATOLOGIA • UNIVERSITÀ DI VERONA • 261 NEOPLASIE DEL PANCREAS DI CUI • ADENOCARCINOMI DUTTALI SPORADICI • TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS 177 84

7. ADENOCARCINOMI DUTTALI • RACCOLTA DATI CLINICO-PATOLOGICI E FOLLOW-UP • RICERCA INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI • Marcatori utilizzati: • BAT 25 (INTRONE GENE MSH2) • BAT 26 (INTRONE GENE KIT) • MICRODISSEZIONE MANUALE DA SEZIONI DI TESSUTO IN PARAFFINA, • AMPLIFICAZIONE PCR UTILIZZANDO PRIMERS FLUORESCENTI E LETTURA • CON ABI PRISM 310 GENETIC ANALYZER, FOSTER CITY CALIFORNIA • ESPRESSIONE FENOTIPICA DEI GENI DEL MISMATCH REPAIR • MARCATORI IMMUNOISTOCHIMICI • MLH1 (G168-15 PHARMINGEN, San Diego, Calif.) • MSH2 (G129-1129 PHARMINGEN, San Diego, Calif.) • MSH6 (Clone 44 PHARMINGEN, San Diego, Calif.) • UTILIZZAZIONE DEL COMPLESSO AVIDINA-BIOTINA-PEROSSIDASI

8. TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS • RACCOLTA DATI CLINICO-PATOLOGICI E FOLLOW-UP • RICERCA INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI • Marcatori utilizzati: • BAT 25 (INTRONE GENE MSH2) • BAT 26 (INTRONE GENE KIT) • MICRODISSEZIONE MANUALE DA SEZIONI DI TESSUTO IN PARAFFINA, • AMPLIFICAZIONE PCR UTILIZZANDO PRIMERS FLUORESCENTI E LETTURA • CON ABI PRISM 310 GENETIC ANALYZER, FOSTER CITY CALIFORNIA

9. RISULTATI ADENOCARCINOMI DUTTALI • 177 PAZIENTI: 100 ♀, 77 ♂ • ETÀ MEDIA 61 ANNI (RANGE 27-94) • TOPOGRAFIA: 152 TESTA DEL PANCREAS • 19 CORPO DEL PANCREAS • 6 CODA DEL PANCREAS • GRADO ISTOLOGICO • G1=8; G2=98; G3=70; G4=1; • TNM • T1N0=2; T1N1=1; T2N0=1; T2N1=2; T3N0=39; T3N1=114; T3N1M1=3;T3NX=2; T4N0=4; T4N1=9; • STADIO I=3; II=39; III=118; IVA=14; IVB=3; • MALATTIA RESIDUA • R0=117; R1=48; R2= 12; • 164 PAZIENTI CON FOLLOW-UP MEDIO DI 16 MESI (RANGE 0,4-156)

10. RISULTATI ADENOCARCINOMI DUTTALI N 175 CASI: STABILI (MSI-) MLH1+, MSH2+,MSH6+ 1 CASO: INSTABILE (MSI+) MLH1+, MSH2+, MSH6+ 1 CASO: INSTABILE (MSI+) MLH1-, MSH2+,MSH6+ T N T

11. MLH1 • MASCHIO, 48 ANNI • NEOFORMAZIONE PERIAMPOLLARE • ADENOCARCINOMA DUTTALE • G3 • T3N1M0 • PAZIENTE DECEDUTO A 16 MESI DALLA DIAGNOSI. • MORFOLOGIA NON ASCRIVIBILE AL GRUPPO DEI CARCINOMI MIDOLLARI

12. RISULTATI TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS • 84 PAZIENTI: 41 ♀, 43 ♂ • ETÀ MEDIA 52 ANNI • TOPOGRAFIA: 46 TESTA DEL PANCREAS • 21 CORPO DEL PANCREAS • 16 CODA DEL PANCREAS • 69 TUMORI NON FUNZIONANTI • 15 TUMORI FUNZIONANTI (11 Insulinomi, 1 Vipoma, 2 Gastrinomi, 1 Glucagonoma) • 42 NEOPLASIE ENDOCRINE BEN DIFFERENZIATE: • 15 A COMPORTAMENTO BIOLOGICOBENIGNO (WHO) • 27 A COMPORTAMENTO BIOLOGICOINCERTO (wHO) • 42 CARCINOMI ENDOCRINI: • 39 BEN DIFFERENZIATISEC. WHO • 3SCARSAMENTE DIFFERENZIATISEC. WHO • FOLLOW-UP MEDIO DI 21 MESI

13. RISULTATI TUMORI ENDOCRINI DEL PANCREAS UN SOLO CASO HA PRESENTATO INSTABILITÀ PER ENTRAMBE LE SONDE ( BAT25EBAT 26). • FEMMINA, 48 ANNI • PREGRESSA PARATIROIDECTOMIA SUBTOTALE PER ADENOMI MULTIPLI (MEN1?) • RESEZIONE INTERMEDIA PER NEOPLASIA SOLIDA DEL DIAMETRO DI CM 1,9 • NEOPLASIA ENDOCRINA BEN DIFFERENZIATA A COMPORTAMENTO BIOLOGICO BENIGNO SEC WHO • SINDROME MEN1 NON CONFERMATA

14. CONCLUSIONI L’INSTABILITÀ DEI MICROSATELLITI NON È IMPLICATA NELLA PATOGENESI DELL’ADENOCARCINOMA DUTTALE SPORADICO E DELLE NEOPLASIE ENDOCRINE DEL PANCREAS. LA VIRTUALE ASSENZA DI MSI IN QUESTI TUMORI PANCREATICI E IN PARTICOLARE NELL’ADENOCARCINOMA DUTTALE, POTREBBE VALORIZZARE LA DISTINZIONE PATOGENETICA DEL CARCINOMA MIDOLLARE DEL PANCREAS.