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Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse

Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse. Gliederung. Überblick Transgene Mäuse Rückkreuzungen Keimbahn-„Knockout“-Mäuse Konditionelle „Knockout“-Mäuse Zusammenfassung. Überblick. Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene aufgrund von Genveränderungen

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Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse

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Presentation Transcript

  1. Transgene, Keimbahn- und konditionelle KO-Mäuse

  2. Gliederung • Überblick • Transgene Mäuse • Rückkreuzungen • Keimbahn-„Knockout“-Mäuse • Konditionelle „Knockout“-Mäuse • Zusammenfassung

  3. Überblick • Ziel: Charakterisierung bestimmter Gene aufgrund von Genveränderungen • Transgene Mäuse: zusätzliche oder veränderte Gene im Genom • „knockout“ Mäuse: ein Gen wird komplett deletiert Aufteilung in Keimbahn- und konditioneller Knockout

  4. Erstellung transgener Mäuse Übertragung der behandelten Eier in eine scheinträchtige Maus Auslösung einer Superovulation und Paarung Entnahme der befruchteten Eizelle und Injektion der DNA Integration des Gens in einige Nachkommen Quelle: Janeway

  5. Rückkreuzungen Einschleusen der Transgene Rückkreuzung mit gewünschtem Stamm Nachkommen sind genetisch heterogen Fortgesetzte Rückkreuzung Quelle: Janeway

  6. „Knockout“-Mäuse Gen Einbau HSV-tk an den Enden Einbau AB-Resistenz Quelle: Janeway Integration an beliebiger StelleAbtöten durch Ganciclovir Einbau an der richtigen Stelle durch homologe RekombinationResistenz Keine IntegrationAbtöten der Zelle durch AB

  7. Züchtung „Knockout“-Mäuse Reimplantation in eine scheinträchtige Maus Transfektion von ES-Zellen mit Knockout- Konstrukt Enstehung einiger chimärer Mäuse Injektion der ES-Zellen in Blastocysten Quelle: Janeway

  8. Konditionelle „Knockout“-Mäuse • Problem: Deletion eines Gens, das fürs Überleben essentiell ist (rezessiv letales Gen) • Erstellung homozygoter Tiere nicht möglich • Verwendung RAG--Mäuse • Nutzung Cre-loxP-System

  9. Verwendung von RAG-defekten Mäusen RAG--Maus: keine B- und T-Zellen Injektion der ES-Zellen in RAG--Blastocyste Chimäre Maus, deren Lymphozyten von den ES-Zellen abstammen Quelle: Janeway

  10. Cre-loxP-System Gen wird von loxP flankiert Cre-Rekombinase schneidet das Gen raus Quelle: Janeway

  11. Zusammenfassung • Transgene Mäuse: -zusätzliches oder verändertes Gen -Injektion in Eizelle, Einbau unspezifisch • Knockout Mäuse: -Keimbahn: Deletion eines Gens in allen Zellen, Einbau über homologe Rekombination (AB-Resistenz, HSV-tk) -Konditionell: Gewebespezifisch oder induziert, RAG-, Cre-loxP

  12. Vielen Dank für die Aufmerksamkeit

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