1 / 15

Haptoglobīna fenotipēšana, izmantojot ELISA ( Enzyme-linked immunosorbent assay ) testu

Haptoglobīna fenotipēšana, izmantojot ELISA ( Enzyme-linked immunosorbent assay ) testu. Bettija Ligere (bl10025) . ELISA tests. ELISA jeb imūnenzimātiskais tests ir bioķīmiska tehnika, ko izmanto, lai noteiktu specifisku antigēnu vai antivielu esamību proteīnā. . ELISA vēsture.

karsen
Download Presentation

Haptoglobīna fenotipēšana, izmantojot ELISA ( Enzyme-linked immunosorbent assay ) testu

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Haptoglobīna fenotipēšana, izmantojot ELISA (Enzyme-linked immunosorbent assay) testu Bettija Ligere (bl10025)

  2. ELISA tests ELISA jeb imūnenzimātiskais tests ir bioķīmiska tehnika, ko izmanto, lai noteiktu specifisku antigēnu vai antivielu esamību proteīnā.

  3. ELISA vēsture • 1900 – antivielu veidošanās teorija (Paul Ehrlich); • 1938 – antivielu – antigēnu saistīšanās hipotēze (John Marrack); • 1948 – antivielu veidošanās plazmas B šūnās; • 1959-1962 – tiek atklāta antivielu struktūra; • 1960 – pirmo reizi tiek aprakstīts radioimunoloģijas tests (Rosalyn SussmanYalow and Solomon Berson); • 1966- metode, kā izveidot kaut ko līzīgu imunosorbentam, lai piestiprinātu antivielas vai antigēnus pie virsmas (Wide and Jerker Porath); • 1971 – tiek izgudrots ELISA tests (Peter Perlmann and Eva Engvall (Stokholmas Universitāte));

  4. ELISA testā izmantotie reaģenti • Imunosorbents(cieta pamatne, kas izklāta ar uztveršanas antigēniem vai antivielām); • Konjugāts (antigēns vai antiviela, kas saistīts ar enzīmu, piemēram, T. gondiiRH tipatahiozītuproteīnuekstrakts); • Mazgāšanas buferis– piemēram, polioksietilēnasorbitāna monooleātu(Tween 20); • Paraugu šķīdinātājs– piemēram, 1% BSA un PBA šķīdums; • Kontroles; • Stop šķīdums - piemēram, sērskābe vai fosforskābe.

  5. ELISA testa pamatprincips http://static.abdserotec.com/uploads/BasicELISASchematic.jpg

  6. ELISA testu veidi: • Direct ELISA tests • Indirect ELISA tests • Competitive ELISA tests • Sandwich ELISA tests http://www.abnova.com/newspaper/1001213/img/ELISA.gif

  7. Iegūtais rezultāts

  8. Datu ieguve

  9. Haptoglobīns D/: proteīns, kurš cilvēka ķermenī tiek kodēts ar HP gēnu. http://en.wikipedia.org/wiki/File:Hem-hap_4f4o.jpg

  10. Fenotipēšana ar ELISA testu

  11. ELISA testa izmantošana fenotipēšanaiplusi Salīdzinot ar gēla elktroforēzi: Nav tik darbietilpīga 4x efektīvāka laika griezumā Jūtīgāka Var strādāt ar paraugiem daudz lielākā atšķaidjumā 5. Nav jāstrādā ar bīstamiem materiāliem (poliakrilamīdu un benzidīnu) Salīdzinot ar TaqMan: Precīzāka Nav nepieciešamas speciālas iekārtas (laminārās plūsmas skapis, real time PCR mašīna) Jūtīgāka Nav tik darbietilpīga

  12. Izmantotā literatūra • Stephanie D Gan and KrutiR Patel (2013) Enzyme Immunoassay and Enzyme-Linked ImmunosorbentAssay ; Journal of Investigative Dermatology (2013) 133, e12. doi:10.1038/jid.2013.287 • Nina S. Levy and Andrew P. Levy (2004) ELISA for Determination of the HaptoglobinPhenotype; Clinical Chemistry vol. 50 no. 11 2148-2150 • Nina S,. Levy et al. (2013) An enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) for thedetermination of the human haptoglobinphenotype; Clin Chem Lab Med. 51(8): 1615–1622. doi:10.1515/cclm-2013-0018 • http://www.elisa-antibody.com/ELISA-Introduction/history-of-elisa • http://en.wikipedia.org/wiki/ELISA • http://www.abdserotec.com/an-introduction-to-elisa.html • http://mmg-233-2013-genetics-genomics.wikia.com/wiki/ELISA#References

  13. Paldies par uzmanību!

  14. Kontroljautājums Kurš ELISA testa tips tiek izmantots haptoglobīna fenotipēšanai?

More Related