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Tetrahymena. Etudes de protéines durant un stress toxique par immunodétection. Buts à long terme. Comprendre les mécanismes moléculaires de réponse aux produits toxiques, chocs oxydatifs et autres "stress chimiques" Trouver des marqueurs potentiels de toxicité

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Presentation Transcript
tetrahymena

Tetrahymena

Etudes de protéines durant un stress toxique par immunodétection

buts long terme
Buts à long terme
  • Comprendre les mécanismes moléculaires de réponse aux produits toxiques, chocs oxydatifs et autres "stress chimiques"
  • Trouver des marqueurs potentiels de toxicité
    • Evaluation de la qualité de l\'eau
    • Evaluation de la toxicité de produits chimiques
    • QSAR
objectifs du projet
Objectifs du projet
  • Identifier la protéine 32 k par immunodétection
  • Déterminer les paramètres d\'induction de cette protéine
    • Cinétique
    • Concentration de toxique
    • Type de toxiques
    • Synergie
    • Etc.
objectifs du projet alternatives
Objectifs du projet (alternatives)
  • Identification par PCR
    • Identifier gène dans génome Tetrahymena
    • Définir sonde spécifique
    • Obtenir sonde
    • Développer protocole
    • Résultat négatif => ????
culture des cellules
Culture des cellules…
  • Culture stock
  • Culture de conditionnement
  • Culture de travail
  • Incubations
traitements
Traitements…
  • Contrôle
  • Choc thermique
  • Toxiques/stress
    • Concentration, durée, cinétique
    • Toxiques, Stress oxydatif, inhibiteurs
incubations
Incubations…
  • 2.5 x 105 cell/mL
  • Volume total : 1 mL
  • Durée: 45 min
  • Milieu culture:
  • Contrôle:
    • Aucun toxique = -
    • 34°C (choc thermique) = +
electrophor se
Electrophorèse…
  • Système de Laemlli (SDS)
  • Gels 5%/12.6%
  • Electrobuvardage
    • Semi-sec
    • Nitrocellulose ou PVDF
immunod tection
Immunodétection
  • Ab secondaire conjugué phosphatase alc.
  • Détection chromogénique ou chémifluorescence
  • Etalons:
  • Contrôle interne: actine
  • Ag: actine, 32k (rat),
autres prot ines int ressantes
Autres protéines intéressantes
  • Métallothioénine
  • GRP76
  • HSP….