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Groupe de Quantification VIH AC 12

Groupe de Quantification VIH AC 12. Réunion de l’Action Coordonnée AC 12 29 février 2008. Christine ROUZIOUX Jean-Christophe PLANTIER. M Gueudin, JC Plantier (Rouen) I Garrigue (Bordeaux) A Vabret (Caen) C Tamalet, Ph Colson (Marseille) O Ghistau (Rennes) K Saune (Toulouse)

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Groupe de Quantification VIH AC 12

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Presentation Transcript

  1. Groupe de Quantification VIH AC 12 Réunion de l’Action Coordonnée AC 12 29 février 2008 Christine ROUZIOUX Jean-Christophe PLANTIER

  2. M Gueudin, JC Plantier (Rouen) I Garrigue (Bordeaux) A Vabret (Caen) C Tamalet, Ph Colson (Marseille) O Ghistau (Rennes) K Saune (Toulouse) D Descamps (Bichat) B Ammelal, (Pitié) A Ganon, V Avettand C Rouzioux (Necker) D Joulia (Côte d ’Ivoire) E Nerrienet (Cambodge) C T Kane (Sénégal) F Rouet (Burkina Faso) M Lien (Vietnam D Rousset, Havlin (Cameroun) M Peeters, Ph Van de Perre (Montpellier) E Menu (I Pasteur) JC Plantier Rouen) C Rouzioux ML Chaix (Necker) ANRS : Working Group for HIV Quantification AC11 Working Group for alternative methods AC12

  3. Rappel des objectifs • Développer des tests pour les essais et les études menées dans les sites ANRS : • Test de charge virale: ARN VIH plasmatique • Test de diagnostic de l’infection de l’enfant : ADN VIH plasmatique • Problème de la diversité génétique des virus VIH-1 • Couts et faisabilité des techniques commerciales • Groupe d’animation de Virologie : inciter les sites à poser des projets et à s’approprier le sujet de la prise en charge de la virologie sur les sites.

  4. Bilan des activités de 2007 • Année 2007 : Interactivités fortes des groupes Nord et Sud: grande demande des sites Sud • Test ARN VIH ANRS • Test de PCR temps réel (LTR) • commercialisé par Biocentric (8 E) • Implantation en routine sur sites sud (Cote d’Ivoire, Cambodge, Vietnam, Burkina Faso, Cameroun Gabon, Congo). • Site de Kesho Bora : Bobo Dioulasso, Mombassa et Durban • Visibilité nationale et internationale : positionnement du test : académique de référence permettant d’aborder les deux problèmes posés par la quantification VIH: • Les références de quantification • L’impact de la diversité génétique

  5. Evaluation du test ANRS au long cours • Evaluations en amont et libération des lots sont faites à Necker (exemple)Sensibilité Spécificité • En 2008 Evaluation du suivi de qualité des lots sur les sites Témoin HIV++ Contrôle de Qualité Mars 2008

  6. Test ARN HIV : Suivi du Témoin HIV++ (Ct et log) selon lots Ct HIV++; n=87 Log HIV++; n=87 3 21 31 14 12 6 3 21 31 14 12 6 Médiane +/- 0.3 log Moyenne: 32,8 Médiane: 32,8 Moyenne: 3,76 Médiane: 3,71 Reproductibilité du témoin HIV ++ correcte: variabilité par rapport à 3.7 log < +/-0.3log

  7. Test ANRS : Programme 2007 • Etude de la diversité génétique • Etude des Séquences LTR, RT et ENV • PANELS des groupes NORD et SUD (difficultés) • Virus sélectionnés sur site (plasmas) , Cameroun, Cambodge et Burkina Faso • Etude de son son impact sur la quantification di VIH par les techniques commerciales et par technique ANRS

  8. Mosaic structures of HIV-1: Circulating Recombinant Forms (CRFs) n= 27 CRF01_AE CRF10_CD CRF02_AG CRF11_cpx CRF03_AB CRF12_BF CRF04_cpx CRF13_cpx CRF14_BG CRF05_DF CRF15_AEB CRF06_cpx CRF07_BC CRF16_A2D CRF08_BC A B C D E F G H J K U B CRF01_AE A2

  9. Comparaison des techniques bDNA Bayeret PCR temps réel ANRS (F Rouet J Aids 2007)

  10. Comparaison des techniques Roche Cobas Monitor et PCR temps réel ANRS (F Rouet 2007)

  11. COHORTE COPANA ANRS(patients en France inclus avant la mise sous traitement) • 28 centres • 540 patients VIH à J0 • 5 techniques commerciales • Quantification ARN VIH 1 en technique commerciale sur site «local» (n=505) • Cobas Amplicor n=202 • Cobas taqman n=80 • bDNA n=116 • Abbott real time n=38 • NASBA n=5 • « Autres» n=64 • Quantification ARN-VIH 1 avec le kit LTR Biocentric ANRS sur site Necker (n=540) • Comparaison technique ANRS LTR avec chacune des techniques commerciales (n=505)

  12. Comparaison du test ANRS à la technique Roche Taqman Etude de Corrélation n=80

  13. Comparaison Techniques LTR-ANRS / Roche Cobas Taqman Méthode deBland-Altman n=79

  14. Comparaisons de la technique ARN VIH ANRS avec les techniques commerciales N Difference > 0.7log < 0.7log LTR- T Com. Copana PRIMO

  15. Panel Nord ANRS Composition

  16. PCR ADN VIH ANRS Diagnostic de l’infection de l’enfantRecommandations OMSutilisation du test Roche

  17. Test de quantification de l’ADN VIH : • Développement d’un test de diagnostic NNé : unanimité dans les sites Sud : • test sang total déposé sur buvard, avec extraction chelex (E Nerriennet et N Ngo) • Test semi-quantitatif en Kit Biocentric • Étude de coût : 4/5 euros • Contrôle qualité ADN VIH (Nord/Sud)

  18. Diagnostic précoce del’infection pédiatrique à VIH auCambodge Utilisation de l’approche ANRS « PCR ADN en temps réel » sur papier buvard Ngin S.1, Horm Srey V.1, Nouhin J.1, Ngo N.2, Tun S.1, Burgard M.3, Ung V.4 Kruy Leang.S.5, Rouzioux C.3, and Nerrienet E.1 5 (PARIS 2007) : . 98 échantillons de bébés : « Buffy coat » déposés sur buvards et testés par PCR ADN VIH en comparaison au plasma sanguin testé par PCR ARN VIH ADN VIH + ADN VIH - ARN VIH + 69 5 (- puis +) ARN VIH - 0 24 CONCLUSIONS : Technique de PCR ADN VIH faisable sur buvards (culots PBMC), Développements à poursuivre, avec essais de tests sur dépôts de 50 à 100 uL SANG TOTAL sur papiers buvards (par piqûre au talon pour faciliter les prélèvements en maternité)

  19. Publications du test ANRS • 20 publications (2005 - 2007)12enCote d’Ivoire, 2 au Cambodge, 1 en France3 au Burkina Faso, 1 en Argentine, 1 au Kenya 4 présentations orales 3 posters ( Kesho Bora : CROI) • 1 thèse d’Université (F Rouet) :

  20. Projets du groupe • Projets de site ou projets collectifs : demande de budget autonome (CSS6) • Peditest DBS : projet de site Abidjan : mise en place du diagnostic BB sur papier buvards par PCR ADN VIH ANRS, pour permettre le passage à l’échelle et étudier la faisabilité dans les conditions ivoiriennes (couvre la région d’Abidjan) FINANCE • 2008 Projet quantification “Enfant” : suivi virologique des enfants infectés ( E Nerrienet : Cambodge + Cameroun) • 2008 Projet Adultes Buvards : sérologie, CV, Résistance (JC Plantier AC 11/12),

  21. Utilisation des Papiers - Buvards : DBS • Beaucoup de discussions • La décentralisation et la question de la biologie • Premier travail effectué au NORD (travail soumis) en multicentrique (6 labos AC 11) : la qualité des papiers est importante :attention à la collecte des échantillons • Nombreux problèmes non résolus : faisabilité, température de conservation (T ambiante, -20°c, -80°c),

  22. Bilan • Bilan plutot POSITIF • Le test ARN VIH : 50 000 tests en 2007 • Le test ADN VIH : prototype est au Cameroun, au Cambodge et en Cote d’Ivoire • Les équipes SUD sont motivées et enthousiastes

  23. Perspectives • Passer à l’étape supérieure…comment?? • Les problèmes techniques sont quasi résolus • Role des test pour modifier les marchés • Problèmes d’approvisionnement de réactifs : plus simples que pour les tests commerciaux • Réflexion à engager sur la biologie, en particulier sur la CV, dans la prise en charge des patients dans les pays du SUD - recherches opérationnelles à engager - partenaires??

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