az immundeficienci k kimutat s nak laborat riumi m dszerei
Download
Skip this Video
Download Presentation
Az immundeficienciák kimutatásának laboratóriumi módszerei

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 35

Az immundeficienciák kimutatásának laboratóriumi módszerei - PowerPoint PPT Presentation


  • 119 Views
  • Uploaded on

Az immundeficienciák kimutatásának laboratóriumi módszerei. Nagy Gábor DEOEC III. Belgyógyászati Klinika Regionális Immunológiai Laboratórium ODLA III. évfolyam Immunológiai diagnosztikai módszerek 2010. március 16. Diagnosztikai algoritmus. Első vizsgálatok: vérkép. metodika:

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about ' Az immundeficienciák kimutatásának laboratóriumi módszerei' - geri


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
az immundeficienci k kimutat s nak laborat riumi m dszerei

Az immundeficienciák kimutatásának laboratóriumi módszerei

Nagy Gábor

DEOEC III. Belgyógyászati Klinika

Regionális Immunológiai Laboratórium

ODLA III. évfolyam

Immunológiai diagnosztikai módszerek

2010. március 16.

els vizsg latok v rk p
Első vizsgálatok:vérkép
  • metodika:
    • optikai elv
    • impedancia elv
  • paraméterek:
    • össz fehérvérsejt szám
    • absz. limfocita szám
    • absz. granulocita szám
    • thrombocita szám és méret (MPV)
els vizsg latok ssz igg iga igm
Első vizsgálatok:össz IgG, IgA, IgM

Turbidimetria

A fényszórással arányos fényintenzitás csökkenését méri

Nefelometria

A szórt fény intenzitását méri

immunglobulin szintek letkor f gg se
Immunglobulin szintek életkor függése

IgG

Immunglobulinok mennyisége

IgA

IgM

immunglobulin szintek ssz ige
Immunglobulin szintek: össz IgE
  • Több nagyságrenddel alacsonyabb koncentráció
  • ELISA (indirekt jelölésű)
  • kU/l
  • hiper IgE-sy
ssz ig szintek v ltoz sa immundeficienci kban
Össz Ig szintek változása immundeficienciákban
  • hipogammaglobulinémia esetén ki kell zárni a veszést (pl. nephrosis sy)
  • Szelektív IgA hiány:
    • se és nyál IgA mérhetetlenül alacsony
  • Hiper IgM: IgM, IgA, IgG
  • Hiper IgE: IgE  (>2000 kU/l)
  • congenitális agammaglobulinémia: IgG, A, M  
  • CVID: Ig  (>=két Ig osztályban)
  • ALPS: Ig 
humor lis immunrendszer igg aloszt lyok
Humorális immunrendszer:IgG alosztályok
  • G1, G2, G3, G4 alosztályok
  • metodika: nefelometria
  • az össz IgG ált normális tartományban van (kivéve, ha IgG1 hiányzik)
  • izolált alosztály deficiencia
  • szelektív IgA hiány mellett gyakran
izohemagglutinin
Izohemagglutinin
  • az A és B vércsoport ellenes, alacsony affinitású IgM típusú At-ek, melyek a vércsoport-szabálynak megfelelően fiziológiásan megjelennek, valószínűleg bakteriális Ag-ek keresztrekaciója miatt
  • hiányuk B-sejt defektusra utal
  • módszer: hemagglutináció
  • hiányzik: pl. CVID
feh rje s poliszacharid specifikus antitestek
Fehérje és poliszacharid specifikus antitestek
  • Fehérje antigénre adott immunválasz
    • Diphtheria toxin e. antitest
    • Tetanus toxin e. antitest
  • Poliszacharid antigénre adott immunválasz
    • H. influenzae e. antitest
    • Pneumococcus e. antitestek
    • Meningococcus e. antitestek
  • módszer: ELISA
sejtes immunrendszer vizsg latai absz limfocita sz m
Sejtes immunrendszer vizsgálatai:Absz. limfocita szám
  • Absz. limfocita szám
    • életkorfüggő referencia tartomány
    • elsősorban a T-sejtszámot tükrözi
    • limfopénia:
      • SCID (gamma-lánc, ADA, PNP, reticuláris dysgenesis)
      • cong. agammaglobulinémia
    • csökken lehet: CVID
b rtesztek
Bőrtesztek
  • T-sejt funkció jó szűrőtesztje
  • vírus és gomba fertőzések
  • antigén:
    • Tuberkulin-bőrteszt
    • Tetanus-bőrteszt
    • Diphteria-bőrteszt
    • Candida-bőrteszt
  • elve: késői típusú hiperszenz.
  • in vitro: limfocita proliferációs tesztek
raml si citometria1
Áramlási citometria
  • T limfocita markerek: CD3, CD2, CD7
  • B limfocita markerek: CD19, CD20, CD21
  • Helper T limfocita marker: CD4
  • Citotoxikus T limfocita marker: CD8
  • NK sejt markerek: CD56, CD16
  • T sejt aktivációs markerek: CD69, CD25, HLA-DR
  • Neutrofil granulocita markerek: CD16, CD32
  • Monocita markerek: CD13, CD14
  • Makrofág markerek: CD36, CD68, CD71
raml si citometria2
Áramlási citometria
  • limfocita szubpopuláció:
    • T: CD3+
      • Th: CD4+
      • Tc: CD8+
    • B: CD19+
    • NK: CD16+, CD56+
raml si citometria4
Áramlási citometria
  • CD40, CD40L, sIgA/G/D (hiperIgM)
  • MHC I-II (MHC deficienciák)
  • CD4-/CD8- T-sejt : ALPS
  • Treg  (CD4+,CD25bright,FOXP3+):
    • Immunodysregulation, polyendocrinopathy, enteropathy X-linked (IPEX)
ada pnp enzimaktivit s
ADA, PNP enzimaktivitás
  • purin anyagcsere enzimei
    • Adenozin dezamináz:
      • adenozin-inozin átalakítás
    • Purin nukleozid foszforiláz:
      • guanozin-guanin
      • inozin-hipoxantin átalakítás
  • Súlyos kombinált ID
    • ADA: T és B
    • PNP: elsősorban T (valószínűleg a T sejtek magas dGTP tartalma miatt)
ada pnp enzimaktivit s1
ADA, PNP enzimaktivitás
  • eritrociták enzimaktivitását határozzuk meg
  • vvt-ket 3x mossuk
  • beállítjuk a hgb-t
  • lizáljuk a vvt-ket
  • megfelelő szubszrátot adunk a rendszerhez
    • adenozin (ADA)
    • inozin (PNP)
  • a keletkező végterméket UV spektrofotometriával mérjük
  • az enzimaktivitást hgb-ra normálva adjuk meg
ada pnp enzimaktivit s2
ADA, PNP enzimaktivitás
  • az enzimaktivitás:
    • homozigóta formában mérhetetlenül alacsony
    • heterozigóta formában kb. az kontrollok fele
  • parciális ADA deficiencia:
    • vvt-ben nem mérhető aktivitás, de más szövetekben van (instabil enzim)
fagocita rendszer vizsg latai abszol t neutrofil sz m
Kostmann sy

ciklikus neutropénia

Chediak-Higashi sy

reticularis dysgenesis

WHIM sy (Wart, Hypogammaglobulinemia, Infection, and Myelokathexis syndrome)

kemoth.

gyógyszerek

immun

nonimmun

autoimmun

alloimmun

hiányállapotok (B2, folsav, réz)

AIDS

Fagocita rendszer vizsgálatai:abszolút neutrofil szám
fagocita sejtek vizsg lata granulocita ellenes at
Fagocita sejtek vizsgálata:granulocita ellenes at.
  • a mérés elve lehet:
    • áramlási citometria
    • sejtes ELISA
fagocita sejtek vizsg lata funkcion lis vizsg latok
Fagocita sejtek vizsgálata:funkcionális vizsgálatok
  • adherencia
    • granulocita szám mérés
    • üveggyönggyel inkubáció
    • granulocita szám mérés
  • adhezív proteinek (áramlási citometria):
    • LAD1: CD11a,b,c/CD18
    • LAD2: CD15
  • kemotaxis
    • Boyden-kamra
fagocita sejtek vizsg lata funkcion lis vizsg latok1
Fagocita sejtek vizsgálata:funkcionális vizsgálatok
  • fagocitózis
    • mikroszkóp: particulumok (élesztőgomba)
    • FC: FITC-cel jelölt immunglobulinnal preopszonizált E. coli
    • telepszámlálás: be nem kebelezett baktérium visszamérése
  • intracelluláris killing
    • telepszámlálás: bekebelezés után életben maradt baktériumok visszamérése
fagocita sejtek vizsg lata funkcion lis vizsg latok2
Fagocita sejtek vizsgálata:funkcionális vizsgálatok
  • oxidatív burst
    • NBT (nitroblue-tetrasolium) redukció
      • sárga NBT->kék/fekete formazán
      • mikroszkópos kiértékelés
    • DHR (dihidro-rodamin) oxidáció
      • DHR->rodamin (fluoreszkál)
    • teljes vér kemilumineszcencia
      • H2O2 + luminol -> 3-aminoftalát* -> 3-aminoftalát + foton
    • szuperoxid anion termelés
      • ferricitokróm-C szuperoxid-dizmutázzal gátolható redukciója (fotometriás kiértékelés)
  • csökkent: CGD
fagocita sejtek vizsg lata enzimdefektusok
Fagocita sejtek vizsgálata: enzimdefektusok
  • MPO
    • primer, azurofil granulumban található enzim
    • H2O2->HOCl
    • deficienciája gyakori: 1:2000
    • benzidin-hidrokloridot oxidálja->kék szín
fagocita sejtek vizsg lata mikroszk pos morfol gia
Fagocita sejtek vizsgálata:mikroszkópos morfológia
  • Chediak-Higashi sy
  • kóros a fagolizoszóma formálás
komplement rendszer ssz komplement aktivit s
Komplement rendszer:össz komplement aktivitás
  • klasszikus út: CH50
    • szenzitizált birka vvt.
  • alternatív út: AH50
    • nyúl vvt.
komplement rendszer ch50 meghat roz s
Komplement rendszer:CH50 meghatározás

50x 100x 200x 400x

Vak

Spontán lísis kontroll

Teljes lízis kontroll

Beteg1

Beteg2

Betegx

hemolízis%=

(ODminta-OD(SPLK))/OD(TLK)

komplement rendszer ch50 meghat roz s1
Komplement rendszer:CH50 meghatározás

logx=logK+1/n*log(y/(1-y))

x=szérum térfogat

y=hemolízis%

CH50=annak a szérumtérfogatnak a reciproka, ami 50%-os lízist okoz

komplement rendszer egyes faktorok
Komplement rendszer:egyes faktorok
  • antigén meghatározás:
    • radiális immundiffúzió
    • rakétaelektroforézis
    • nefelometria
    • ELISA
  • funkciónális meghatározás:
    • hemolitikus assay (a mérendő faktor kivételével a faktorok feleslegben)
    • klasszikus út komponensei: szenzitizált birka vvt.
    • alternatív út komponensei: nyúl v. tengerimalac vvt.
ad