Diagnostikk av Limb Girdle

1. Diagnostikk av Limb Girdle The long and winding road.. S. Lindal Fagkonferansen 27.10.05

2. Muskelbiopsi • Åpen biopsimetode • Mer materiale, flere muligheter • God kvalitet , korrekt diagnose

3. Det skjæres ca. 30 snitt i ulike nivå…. • H&E • Gomori trichrome • ATP (4.3-4.5- 9.4) • NADH • Sur phosfatase • Non-spesifikk esterase • PAS • Oil-red O • MHC1 • Ev. Metabolsk • Cox/SDH • PFK • AMP • Myophos

4. Restmaterialet frysestil biobank • Dystrofin • Alfa-dystroglycan • Alfa-sarcoglycan • Beta-dystroglycan • Beta-sarcoglycan • Delta-sarcoglycan • Gamma-sarcoglycan • Dysferlin • Spectrin • Merosin (to ulike) • Emerin

5. Muskel dystrofier Kongenitte myopatier Inflammatoriske myopatier Metabolske myopatier Sykdommer som skyldes defekt i den nevromuskulære forbindelsen (motorisk endeplate) Nevrogene muskelsykdommer Hvike grupper muskelsykdommer?

6. Membranproteiner i muskelcellen(Dystrofin-relaterte proteiner) • Cytoskjelett forbindelser • Forbindelse mellom myofibriller og sarcolemma • Ved Z-linjene og M-linjene

7. Dystrofin-relaterte proteiner

8. Immunhistokjemi - dystrofin • Normal • Duchenne • Bærer

9. Immunhistokjemisk analyse • Dystrofin • Alfa-dystroglycan • Alfa-sarcoglycan • Beta-dystroglycan • Beta-sarcoglycan • Delta-sarcoglycan • Gamma-sarcoglycan • Dysferlin • Spectrin • Merosin (80 and 300) • Emerin

10. Western blot • Dystrophin • Calpain • Dysferlin • Merosin • Caveolin

11. Resultat (siden 1994) • Alfa-sarcoglycan (adhalin) • Beta-dystroglycan • Beta-sarcoglycan • Delta-sarcoglycan • Gamma-sarcoglycan • Spectrin

12. Calpain LG 2A Siden 1998 • Western blot: • 88 Normal bands • 10 pasienter med totalt manglende bånd • 17 pasienter med svake calpain bånd • DNA analyser: • 4 pasienter med calpain mutasjon

13. CURRENT CLASSIFICATION OF LGMDBushby and Beckmann, 2003 DISEASE GENE LOCUS GENE PRODUCT MW (kDa) LOCALISATION LGMD2A 15q15 (1995) Calpain 3 94 LGMD2B 2p13 (1994) Dysferlin 230 Membrane LGMD2C 13q12 (1992) α- sarcoglycan 35 Transmembrane LGMD2D 17q11-q12 β-sarcoglycan 50 Transmembrane LGMD2E 4q12 (1995) γ-sarcoglycan 43 Transmembrane LGMD2F 5q33-34(1996) δ-sarcoglycan 35 Transmembrane LGMD2G 17q11-q12 (1997) Telethonin 19 Sarcomeric LGMD2H 9q31 (1998) TRIM32 72 LGMD2I 19q13 (2001) FKRP LGMD2J 2q 24-31 Titin4200 Sarcomeric

14. Grunnlag for å gjøre FKRP DNA analyse for FKRP fra pasienter med: • Biopsier med svakt eller manglende calpain bånd • Biopsier med partiell merosin ekspresjon • Biopsier med manglende alfa-dystroglykan • Biopsier med uavklarte primære muskelsykdommer • Biopsier med uavklarte inflammatoriske myopatier

15. Konklusjon: Pr. 19.10.05 • 36 pasienter med fukitin relatert protein (FKRP) mutasjon 826C > A) i Norge (analysert ved Medisinsk genetikk, UNN Tromsø) • 3 compound heterozygous (2 familier) Heterozygous • 33 homozygote fra 28 familier • Fra alle regioner i Norge

16. Pasientene • Klinikk: • 10- 52 år • Lett til moderat forhøyet CK • Svær variasjon I klinisk bilde (fenotype) • fra et tidlig hurtig progredierende (Duchenne-like) • Voksen- langsom progredierende limb-girdle phenotype • Muskel biopsi • Diffuse non-spesifikke myopati forandringer • Nevrogene forandringer • Inflammatoriske funn • Metabolske funn

17. abnorm expresjon avα-Dystroglycan α - Dys

18. Inflammatoriske funn • Nekrotiske fibre • Mononukleær betennelses infiltrat • Positiv MHC1 farging

19. Klassifikasjon av kongenitte muskeldystrofier (MDCS) Guppe II • Abnormal glycosylation of α-dystroglycan • Fukuyama MDC • Muscle-eye-brain-disease • MDC 1C/LGMD 2I • Walker-Warburg-syndrome • Others rare forms Ullrich CMD MDC1A FCMDMEBFKRP/MDC1CMDC1BWWS Intergrin-α7Deficiency DMD

20. Konklusjon Pasienter med lenge pågående kronisk muskelsykdom: . Bruk nasjonalt muskelregister ! • Gjør immunfarging for: • α- Dystroglycan • α2 Laminin • Western blot for Calpain 3 • Så • Overvei DNA analyse for FKRP