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Universidad del Sagrado Corazón

Universidad del Sagrado Corazón. Departamento de Ciencias Naturales Prof. Mayra Rolón. Proyecto de Vinculación Comunitaria: Análisis Bacteriológico de agua en el Caño Martín Peña y la laguna Los Corozos. Bio 206 Microbiología. Vinculación Comunitaria.

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Presentation Transcript

  1. Universidad del Sagrado Corazón Departamento de Ciencias Naturales Prof. Mayra Rolón

  2. Proyecto de Vinculación Comunitaria: Análisis Bacteriológico de agua en el Caño Martín Peña y la laguna Los Corozos. Bio 206 Microbiología

  3. Vinculación Comunitaria • “El Aprendizaje Mediante el Servicio a la Comunidad ("Service Learning") permite que el mundo que nos rodea sea un laboratorio docente para el estudiante. Se ha comprobado que esta metodología pedagógica no solamente da relevancia y significado a los estudios, sino que también mejora el rendimiento académico del estudiante” (E. Freire, Distrito Escolar de Filadelfia).

  4. Experiencia + Reflexión=Crecimiento • EL aprendizaje mediante el servicio a la comunidad es significativamente el hallazgo más importante en la educación universitaria hoy en día, desde las reformas curriculares de la década de los 60. • “Yo entiendo que se convertirá en un legado por su impacto duradero en la educación universitaria. Tendrá un impacto permanente, tal como lo fue la lucha por los derechos civiles la cual grabó en las mentes de los estudiantes su marca para futuras generaciones”; dijo Corrigan, Presidente de San Francisco State University.

  5. Objetivos de la investigación: • Tomar muestras de agua en el Caño Martín Peña y en la laguna Los Corozos. • Realizar análisis bacteriológicos y detectar la presencia de coliformes en el agua. • Familiarizar al estudiante con técnicas microbiológicas y de investigación. • Divulgar los resultados obtenidos a representantes de la comunidad.

  6. Introducción: • El agua de consumo humano de la mayor parte de las comunidades y municipios proviene de aguas superficiales ( ríos, arroyos y lagos, entre otros). Estas aguas pueden estar contaminadas con residuos domésticos, agrícolas e industriales. • En la contaminación de origen biológico, el agua puede comprometer a la salud y a la vida si contiene microbios patógenos.

  7. Los patógenos más frecuentes que se transmiten a través del agua son aquellos que causan infecciones del tracto intestinal (fiebre tifoidea, cólera, shigelosis y enteritis virales, entre otras). • Estos microbios están presentes en las heces u orina de las personas infectadas y pueden pasar al agua.

  8. Los controles microbiológicos rutinarios para determinar la potabilidad del agua (libre de microbios patógenos) no se basan en el aislamiento e identificación de microbios patógenos, sino que se basan en la búsqueda de microbios cuya presencia indique la posibilidad de la presencia de microbios patógenos. • Estos microbios indicadores sirven como un sistema de alarma.

  9. ¿Qué es un microbio indicador? • Es un tipo de organismo cuya presencia en el agua es una evidencia de que el agua está contaminada con materia fecal de humanos u otros animales de sangre caliente. • Este tipo de contaminación fecal significa que cualquier microbio patógeno que exista en el tracto intestinal de estos animales puede estar presente también en el agua. • El indicador usado se llama Escherichia coli.

  10. E. coli es una bacteria coliforme fecal y su detección se puede hacer mediante el cultivo en caldo de lactosa (azúcar), por la determinación del número más probable (MPN) o mediante filtración en membrana usando medios selectivos y diferenciales. • Por muchos años, la calidad del agua se determina monitoreando la presencia de bacterias coliformes.

  11. ¿Qué es un coliforme? • Son bacterias que viven y se replican en el intestino de humanos y otros animales de sangre caliente y son constituyentes normales de la materia fecal. • En términos generales, no causan enfermedades en los humanos, pero se usan como indicadores de la presencia de microbios que causan enfermedades. • Esto significa que si detectamos coliformes en el agua, se presume que también están presentes microbios peligrosos.

  12. De la misma forma si no se detectan coliformes, se presume en términos generales, que tampoco hay microbios peligrosos, excepto virus entéricos y algunos parásitos protozoarios. • Por lo tanto en los pasados años, la EPA concluyó que los coliformes no son indicadores adecuados para el parásito Giardia y algunos virus entéricos.

  13. Caño Martín Peña y la laguna Los Corozos: • Por décadas las aguas del Caño Martín Peña se han contaminado con muchos agentes biológicos. Esta práctica reduce el flujo de agua del estuario de la bahía de San Juan. • Se construyeron comunidades a lo largo del canal sin servicios sanitarios tales como un sistema adecuado para disponer de los desperdicios sólidos.

  14. Como resultado de ésto, las descargas de los desperdicios no tratados impactaban directamente el Caño. • Recientemente se dio a conocer un plan para limpiar y preservar el estuario de la Bahía de San Juan aprobado por EPA y el gobierno de Puerto Rico. • El proyecto de limpieza tendrá un costo aproximado de 300 millones de dólares.

  15. Entre los retos que tiene el gobierno,está corregir el estado tan deprimente del Caño Martín Peña, que conecta la Bahía de San Juan con la laguna San José (Laguna los Corozos).

  16. E.P.A. Región 2

  17. Estuario de la bahía de San Juan

  18. Itinerario de Actividades

  19. Tabla de contenido sobre el análisis bacteriológico

  20. Fase Presuntiva En esta fase se parte de la presunción que hay coliformes en las muestras de agua.

  21. Pruebas de fermentación en tubos de lactosa

  22. Conclusión: Hay bacterias en las muestras de agua obtenidas que fermentan lactosa y a su vez producen gas. Este es el primer indicador de presencia de coliformes en las muestras de agua.

  23. Fase Confirmatoria En esta fase debemos confirmar la presencia de coliformes en el agua. Se realizan pruebas adicionales de fermentación utilizando caldos de lauril sulfato.

  24. Pruebas de fermentación en tubos de lauril sulfato

  25. Conclusión: Las bacterias que se encuentran en los tubos fermentan lauril sulfato y a su vez producen gas. Esto confirma la presencia de coliformes en las muestras. Esto quiere decir que hay indicadores de contaminación fecal.

  26. Fase Completa Aislar e identificar taxonómicamente las bacterias encontradas. Se cultivarán las muestras en medios selectivos y diferenciales.

  27. Pruebas en Agar EMB (Eosin Methylene Blue)

  28. Conclusión: Esto platos demuestran que las bacterias en las muestras de agua contienen coliformes. Esto completa las pruebas de detección de coliformes en el agua.

  29. Pruebas Semi-Cuantitativa y Cuantitativa Estas pruebas nos ayudan a estimar la población microbial y bacterial en el agua.

  30. Análisis Semi-Cuantitativo: Estimado del número más probable (MPN) • Este conteo se basa en una estimación de microbios que puede haber por cada 100 ml de agua. Se utilizan unas tablas que estadísticamente estiman la cantidad de tubos fermentados con la cantidad microbial en el agua. • Para realizar este conteo microbial debemos tener 15 tubos con lactosa o con lauril sulfato, que se organizan en tres grupos de 5 tubos con volúmenes de 10 ml, 1 ml y 0.1 ml de la muestra de agua experimental. • Dependiendo de la cantidad de tubos fermentados, se estima la cantidad de microbios/100 ml de agua. • En nuestra investigación todos los tubos fermentaron, así que el número estimado fue mayor de 1,600 coliformes por cada 100ml de las muestras de agua.

  31. Tabla de MPN

  32. Análisis Cuantitativo: Diluciones en series para calcular el número de célulasbacteriales por cada ml. • Se hicieron diluciones en series a las muestras del Caño Martín Peña (profundo) yde la laguna Los Corozos (profundo), hasta diluirlas a un máximo de 1/10,000,000. Es decir, de 10-2 hasta 10-7 . Los resultaron fueron: • De la muestra del Caño Martín Peña (profundo) se calculó alrededor 2,000,000de célulaspor cada mililitro en muestra de agua. Se aplicó la fórmula: B= (D) (C) • De la muestra de Laguna Los Corozos (profundo) se calculó alrededor4,000,000 de células por cada mililitro en muestra de agua. • Agua sin tratar/ coliformes totales o fecales: Mayor de 100,000.

  33. Tabla de Diluciones

  34. Pruebas Complementarias Estas pruebas complementan la fase completa.

  35. Pruebas en el agar TSI (Triple Sugar Iron)

  36. Conclusión: Esta prueba nos evidencia que las bacterias cultivadas en el agar TSI fermentan en la parte estocada“butt” y la pendiente“slant”. Además producen gas. Ninguna de las muestras produjo sulfuro de hidrógeno.

  37. Pruebas en Agar Mac Conkey

  38. Conclusión: Estos platos demuestran que las bacterias en las muestras de los diferentes lugares contienen coliformes. Esta prueba complementa la fase completa.

  39. Detección de dos tipos de bacilos entéricos patógenos: Cultivo en Agar Salmonella-Shigella

  40. Conclusión: Significa que las muestras analizadas no hay aparente crecimiento o indicio de presencia de Salmonella y de Shigella.

  41. Aplicación del Método de Filtración del Agua con membrana 0.45 m.

  42. Procedimiento y Resultado del Filtrado en Membrana 0.45 m • Resultado del filtrado: • colonias verde metálico: I.D. Escherichia coli • colonias rosadas: I.D. Enterobacter y Klebsiella • Se aislaron más de 10 colonias/ 100 ml. de agua. • Límite crítico > de 4 colonias de coliformes/ por cada 100 ml. de agua.

  43. Otras Pruebas Bioquímicas Estas pruebas nos ayudan a conocer el comportamiento bioquímico de las bacterias. Por tal razón, nos ayudan a identificar taxonómicamente las bacterias.

  44. Método Convencional (IMViC) Conclusión: En los tubos hay presencia de movilidad.Además, dieron indol negativo. Conclusión: El Rojo de Metil es un indicador de cambios de ph en el medio. El resultado obtenido fue negativo.

  45. Método Convencional Conclusión: Esto significa que las bacterias usan el citrato suministrado en los tubos como fuente de energía. Conclusión: Esto significa que las bacterias que están en los tubos dieron positivo a la producción de acetoína.

  46. Método Comercial: EnterotuboII • Esta técnica es comercial, y relativamente más simple y fácil de realizar que las pruebas IMViC, ya que consiste de un tubo con diferentes recámaras en su interior que contiene diferentes medios nutritivos selectivos y diferenciales.A ésta se le introduce una muestra de X o Y colonia bacterial, y dependiendo de la reacción química y del cambio en color se determinan si es positivo o negativo. Gracias a un código biológico ya establecido podemos identificar la taxonomía de bacterias. • En el laboratorio se analizaron las colonias encontradas en el agar EMB. Los resultados fueron los siguientes:

  47. Resultados de Pruebas en Enterotubo II E. Escherichia coli (Agar EMB)Biocode: 3, 6, 1, 6, 0Escherichia coli A. Caño Martín Peña (superficie) Biocode: 3, 6, 7, 6, 3 Klebsiella oxytoca B. Caño Martín Peña (profundidad) Biocode: 3, 6, 3, 6, 3 Enterobacter aerogenes C. Laguna Los Corozos (superficie) Biocode: 3, 2, 2, 4, 0 Klebsiella ozaenae D. Laguna Los Corozos (profundidad) Biocode: 3, 2, 1, 4, 3 Enterobacter sakazakii

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