Yüksek Konsantrasyonlardaki Dizel Egzoz Partiküllerinin İnsan Akciğer Epitelyal Hücre Canlılığına ve Ölümüne Etkisi

1. Yüksek Konsantrasyonlardaki Dizel Egzoz Partiküllerinin İnsan Akciğer Epitelyal Hücre Canlılığına ve Ölümüne Etkisi Hasan Bayram1*, Kazuhiro Ito2, K. Fan Chung2. 1Gaziantep Üniversitesi Tıp Fakültesi Göğüs Hastalıkları AD; 2Thoracic Medicine,National Heart & Lung Institute, Imperial College, London, UK. *ERS Long-term Research Fellowship ile desteklenmiştir

2. Giriş-1 • Partiküler madde 10µm (PM10) kirliliği ile respiratuar morbidite ve kardiopulmoner mortalite arasında ilişki, (McConnell R et al, 2003,Pope CA et al, 2004 ) • Hava yolu epitel hücreleri PM10-indüklediği respiratuar morbiditede rol oynayabilir • Dizel egzoz partikülleri (DEP) hava yolu epitel hücrelerinden inflamatuar mediatör salınımını artırırlar (Bayram H et al, 1998)

3. Giriş-2 • DEP, serumsuz ortamda,oksidatif stresi artırmak, p21CIP1/WAF1 ekspresyonunu baskılamak, JNK ve NF-B yolaklarını uyarmak suretiyle A549 hücre proliferasyonunu artırabilir. (Bayram H et al, 2006) • DEP respiratuar hücrelerin apoptozisi ve nekrozuna yol açabilir. (Matsuo M et al, 2003; Li N et al, 2002; Hiura TS et al, 2000)

4. Hipotez • Serumun bulunduğu normal hücre kültürü ortamında, DEP’ninyüksek konsantrasyonları hücre apoptozis/ nekrozisini indükte etmek suretiyle A549 hücre canlılığını azaltabilir.

5. Amaç • Yüksek konsantrasyonlardaki DEP’nin hava yolu epitel (A549) hücrelerinin canlılığı, apoptozisi ve nekrozu üzerine olan etkilerini araştırmak

6. Metod • A549 hücre kültürü • %0-10 buzağı serumu (‘foetal calf serum’, FCS) varlığında 0, 10, 200 ve 400g/ml DEP ile 48 saat inkübasyon • MTT Boyama:Hücre canlılığı • Flow Sitometri (FACS):Apoptotik cisimciklerin varlığı (Annexin V/PI boyama)

7. %0 FCS ortamında DEP ile 48 saat inkübasyonun A549 hücre canlılığına etkisi *p<0.05 ve **p<0.001-0g/ml DEP

8. %1 FCS ortamında DEP ile 48 saat inkübasyonun A549 hücre canlılığına etkisi *p<0.05 ve **p<0.001-0g/ml DEP

9. %3.3 FCS ortamında DEP ile 48 saat inkübasyonun A549 hücre canlılığına etkisi **p<0.01-0g/ml DEP

10. %10 FCS ortamında DEP ile 48 saat inkübasyonun A549 hücre canlılığına etkisi **P<0.01-0g/ml DEP

11. %3.3 FCS ortamında DEP ile 48s inkübasyonun A549 hücre apoptozis/nekrozisine etkisi SF **p<0.01 -0g/ml DEP

12. Özet • Serumsuz ortamda, 10µg/ml DEP A549 hücre canlılığını artırdı, • %1-3.3 FCS varlığında, 200g/ml DEP hücre canlılığını azalttı • %10 FCS varlığında, DEP hücre canlılığı üzerinde herhangi bir etki göstermedi • %3.3 FCS varlığında, 200-400g/ml DEPhücre apoptozis/nekrozunu artırdı.

13. Sonuç • DEP hava yolu epitel hücrelerinin apoptozis/nekrozisini uyarmaktadır • Altta yatan mekanizmaların araştırılması gerekmektedir

14. Teşekkürler

16. Conclusion • DEP effect of A549 cell viability and apoptosis/necrosis depends on its dose and presence of serum in cell culture condition. • DEP effect cell viability and apoptosis/necrosis; an effect dependant on concentration of DEP or serum.

17. Effect of DEP on viability ofA549 Cells in 0-10% FCS following 48hrs’ incubation

18. 24 hrs Effect of DEP on viability of A549 Cells (MTT Assay) ***P<0.0001 vs 0g/ml DEP 72 hrs 48 hrs

19. Effect of DEP on apoptosis of A549 cellsfollowing 48hrs’ incubation *P<0.05 and **P<0.005 vs SF

20. Background • PM10 (10-50g/cm3) induce proliferation and apoptosis (25-50g/cm3) of murine alveolar epithelial cells (Timblin CR et al, 2002) • PM10 lead to cell death, DNA breakage and apoptosis in A549 cells (Moreno EA et al, 2002 )

22. Cell Signalling Pathways Associated with Apoptosis

23. p21 and cell cycle pathways