Grand Oral E2M2 – 29-30 Juin 2009 UCBL

1. Étude des interactions fonctionnelles entre les glycoprotéines d’enveloppe F et HN, impliquées dans le mécanisme d’entrée cellulaire des virus parainfluenza humains et animaux. Jean-Christophe Le Bayon • VirPath • CNRSFRE 3011 Dr Manuel Rosa-Calatrava Pr Bruno Lina Grand Oral E2M2 – 29-30 Juin 2009 UCBL ED341 –E2M2

2. LES PARAINFLUENZA hPIV2 et NDV Famille : Paramyxoviridae Genre : Rubulavirus Avulavirus • Maladies respiratoires • Pas de vaccins/antiviraux • Virus enveloppé Ø 200nm • ARN négatif, simple brin Terrier et al. (2008) L’entrée dans la cellule est possible grâce aux GP F et HN

3. La fusion membranaire Cellular membrane N C F2 S Fusion peptide S HR1 HN F Extracellular domain F1 HR2 Transmembrane region Cytoplasmic tail N C F HN Takimotoet al. (2002) Viral envelope

4. ObjectiFs • Caractérisation de mutants de F de hPIV2 • Mutation observée sur des souches variantes de hPIV-2 (T96A) ou transposées d’un variant de PIV-5 • Rôle de ces mutations dans la fusion et dans l’interaction entre F et HN ? • Méthodes • Analyse bioinformatique de F hPIV2 • Clonage des gènes F et HN et mutagénèse • Expression transitoire (cellules A549) • Cytométrie en flux et test de fusion intercellulaire

5. Travail Abordé en Master • T96A: favorise l’activation par HN • I24P: F “indépendante” de HN • K133E: interaction entre F et HN et augmentation de la fusion • I294A: favorise l’activation par HN T96A K133E Tête I24P I294A Tige • 2 parties distinctes de la tête de F semblent être impliquées dans l’interaction F-HN

6. Projet doctoral Caractérisation fonctionnelle des GP mutantes Études des interactions F-HN mécanisme d’entrée → Design d’antiviraux Observations structurelles sur les GP Encadrants : Pr Bruno Lina (accueil) Dr Manuel Rosa-Calatrava (tuteur) Gaëlle Cartet (technicienne)

7. Caractérisation de la fusion • Méthodes • Expression de glycoprotéines mutantes (WB, FACS) • Capacité fusogène des GP (Test de fusion intercellulaire luciférase) • Comportement des mutants dans un contexte pseudo-viral ou viral (VLP et génétique inverse, coopération avec Dr Dimitri Lavillette – INSERM U758-ENSL) • Meilleure mesure de la fusion membranaire (RT lipid-mix assay) • Objectif • Détermination des résidus impliqués dans le rôle fusogène de F

8. Étude des interactions F/HN • Méthodes • Délétions des GP • Interactions entre F et HN (Cross-Linking, CoIP, avec Dr JC Cortay) • Objectif • Détermination les régions, sur F et sur HN, impliquées dans l’interaction F et HN • Régions permettant l’activation de F • Région permettant l’inhibition de F

9. Observations structurelles • Méthodes • Observation des VLP et virus (MET, cryoMET, coopération avec Dr Daniel Thomas – Université Rennes I) • Observation in silicodes mutations sur la structure (coopération avec Pr Gary Taylor et/ou Dr Ruppert Russel – Université de St Andrews, UK) • Objectif • Détermination les régions, sur F et sur HN, impliquées dans l’interaction F et HN • Régions permettant l’activation de F • Région permettant l’inhibition de F

10. Mon Profil et mon avenir • Atouts • Compétences scientifiques adaptées • Bonne connaissance du sujet • Envie de communiquer sur mes résultats • Envie de transmettre mon expérience • Pendant la thèse • Exercer une activité de monitorat • Doctorant conseil • Me constituer un réseau professionnel • Après la thèse • Post-doctorat ?? • Activité de consulting ??