1 / 24

Histologická technika

Histologická technika. D. Kylarová. Způsoby vyšetření. cytologické vyšetření. histologické vyšetření. biopsie. exfoliativní cytologie. aspirační cytologie. Cytologický preparát. Histologický preparát. Zpracování tkání - histologie. Odběr Fixace Krájení tkáně prosycené parafínem

christmas
Download Presentation

Histologická technika

An Image/Link below is provided (as is) to download presentation Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author. Content is provided to you AS IS for your information and personal use only. Download presentation by click this link. While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server. During download, if you can't get a presentation, the file might be deleted by the publisher.

E N D

Presentation Transcript

  1. Histologická technika D. Kylarová

  2. Způsoby vyšetření cytologické vyšetření histologické vyšetření biopsie exfoliativní cytologie aspirační cytologie

  3. Cytologický preparát

  4. Histologický preparát

  5. Zpracování tkání - histologie • Odběr • Fixace • Krájení • tkáně prosycené parafínem • zmrzlé tkáně • Barvení

  6. Odběr • Biopsie • Punkce • Excize • Kyretáž • Peroperační biopsie • Nekropsie Postup: • Oddělení vzorku - velikost tkáňového bločku max 1cm2 • Oplach va fyziologickém roztoku • Vložení do fixační tekutiny - ihned po odběru !!! • Označení vzorku

  7. Fixace • Def.: rychlá a šetrná denaturace bílkovin bránící autolýze tkání • Podmínky fixace • Rychlost - odběr, průnik, velikost vzorku (1cm2, 1mm2) • Zachování struktury • Barvitelnost • Fixace fyzikální • Fixace chemická – fix. tekutiny:

  8. Fixační tekutiny • formaldehyd (10% formol, neutrální nebo pufrovaný) • Bouinova t. (formol + k. pikrová) • Zenkerova t. (dvojchroman draselný, sublimát, formol) • metacarn (formol, metanol, voda) • oxid osmičelý, glutaraldehyd

  9. Krájení parafínových řezů • Odvodnění - vzestupná etanolová řada • Projasnění - xylen • Prosycení parafínem • Zalití do parafínu • Krájení na mikrotomu (tloušťka řezu 4-10mm • Rotační x sáňkový mikrotom • Lepení řezů na podložní skla

  10. ODVODNĚNÍ ŘEZŮ

  11. XYLEN

  12. PROSYCENÍ PARAFINEM I

  13. PROSYCENÍ PARAFINEM II

  14. ZALÉVÁNÍ II

  15. ZALÉVÁNÍ III

  16. Krájení zmrazených tkání • Zmrazovací mikrotom, kryostat • Použití: • Peroperační biopsie • Průkaz enzymů • Barvení tuků • Imunohistochemie

  17. Barvení parafínových řezů HE • Odparafínování • Zavodnění • Barvení hematoxylinem • Praní v tekoucí vodě • Barvení eosinem • Odvodnění • Projasnění • Montování

  18. Elektronová mikroskopie Transmisní elektronový mikroskop • Princip: emitované elektrony procházejí preparátem, po jejich dopadu na fluorescenční stínítko vzniká obraz (obdoba SM) • Zpracování tkáně • Odběr (supravitální, velikost vzorku max 1mm2) • Fixace dvoustupňová (glutaraldehyd, OSO4) • Odvodnění (aceton) • Prosycení (směs epox. pryskyřice s tužidlem) • Vytvrzení a zalití (epoxidové pryskyřice, metakryláty) • Krájení (ultramikrotomy – 30 – 60nm) • Přenesení na nosné terčíky • Kontrastování (uranyl acetát)

  19. Elektronová mikroskopie Polotenké řezy • Řezy krájené na ultramikrotomu za účelem prohlížení v SM Využití - orientace v bloku před vyšetřením v TEM - studium cytologických detailů v SM (!Fixace!) řezy silné 0,5-1mm se přenesou na podložní sklo a barví se roztokem toluidinové modři (popř. azur…)

  20. Elektronová mikroskopie Rastrovací elektronový mikroskop • Princip: úzký svazek elektronů projíždí preparát, odražené elektrony na stínítku dávají plastický obraz • Zpracování tkáně • Odběr (může být i větší vzorek než pro TEM) • Fixace • Odvodnění (šetrné vysušení za zvýšeného tlaku a teploty) u tvrdých tkání (zub, kost) tento bod vynecháme • Pokovení (naprášení kovových častic na povrch) Rozlišovací schopnost do 300 000x

  21. Díky za pozornost 

More Related