Critères d’identification d’un Staphylococcus

1. Critères d’identification d’un Staphylococcus Bouillon special pour la recherche de la staphylocoagulase Composition Digestion papaïnique de viande de boeuf500 mL Hydrolysat de gélatine 20 mL Citrate trisodique 3 g Eau distillée 480 mL Source de C et N Source minérale Bouillon CŒUR CERVELLE Composition Infusion de cervelle deveau 200 g Infusion de cœur de bœuf 250 g Peptone de gélatine 10 g NaCl 5 g Phosphate disodique 2,5 g Glucose 2 g Eau distillée qsp 1 L Source de C et N Source minérale Recherche de l’enzyme après 24 heures d’incubation dans ces bouillons à 37°C.

2. Recheche de la staphylocoagulase 0,25 mL de bouillon cœur cervelle : 5 gouttes 0,25 mL de plasma oxalaté Incuber à 37°C pendant 30 min à 1 h Bouillon cœur cervelle Tube stérile Plasma oxalaté Incliner délicatement le tube Prise en masse du mélange  présence de la Sptaphylocoagulase Le milieu reste liquide  absence de la Sptaphylocoagulase

3. Recherche de la thermonuclease 0,5 mL de bouillon cœur cervelle : 10 gouttes Porter au bain-marie à 100°C pendant 15 min Bouillon cœur cervelle Tube stérile 1 goutte de milieu non chauffé 1 goutte de milieu chauffé Puits formé à l’aide d’une pointe de micropipette Incuber 4 heures à 37°C ADN au bleu de touluidine

4. Lecture Cas n°1 Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN sur bouillon normal  présence d’une activité DNase normale Cas n°2 Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN après passage à 100°C  présence de la thermonucléase Absence de produits d’hydrolyse de l’ADN après passage à 100°C absence de la thermonucléase Mise en évidence des produits d’hydrolyse de l’ADN sur bouillon normal présence d’une activité DNase normale Identification deStaphylococcus aureus entérotoxique Cas n°3 Si test négatif pour les deux bouillons  il ne s’agit pas d’un Staphylococcus aureus Ce n’est pas unStaphylococcus aureus entérotoxique

5. Pastorex Staph • Le réactif Pastorex Staph + contient des particules de latex qui permettent la recherche simultanée sur les Staphylococcus: • du facteur d’affinité pour le fibrinogène (RF), désigné sous le nom de coagulase liée, • de la protéine A qui possède une affinité pour le fragment Fc des IgG • des antigènes polysaccharidiques capsulaires des Staphylococcus résistants à la méticiline (antibiotique) Toute agglutination du réactif test en présence d’une souche de Staphylococcus permet d’identifier Staphylococcus aureus. Émulsionner les colonies pendant 10 secondes. Prendre une pipette pour chaque test. Mode opératoire Lame ou plaque d’agglutination 1 goutte de témoin négatif 1 goutte de réactif test Lecture Présence d’une agglutination en moins de 40 s  test positif Identification deStaphylococcus aureus Absence d’agglutination  test négatif

6. Schéma explicatif Ac anticapsulaire Protéine A + S aureus acapsulé bille de latex fibrinogène Facteur d’affinité pour le fibrinogène IgG Reconnaissance de la protéine A et du facteur d’affinité pour le fibrinogène  Agglutination

7. Ag capsulaire + S aureus capsulé (METI R) Reconnaissance de l’Ag de capsule  Agglutination