slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
血清谷 — 丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) PowerPoint Presentation
Download Presentation
血清谷 — 丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 11

血清谷 — 丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法) - PowerPoint PPT Presentation


  • 136 Views
  • Uploaded on

血清谷 — 丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法). 【 目的要求 】 1. 掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2. 熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。 3. 了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。. 【 实验原理 】 血清中的谷 - 丙转氨酶( ALT ),在 37℃ 、 pH7.4 的条件下,可催化基质(底物)液中的丙氨酸与 α- 酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about '血清谷 — 丙转氨酶活性的测定(改良赖氏法)' - zack


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide2
【目的要求】
  • 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。
  • 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。
  • 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。
slide3
【实验原理】
  • 血清中的谷-丙转氨酶(ALT),在37℃、pH7.4的条件下,可催化基质(底物)液中的丙氨酸与α-酮戊二酸生成谷氨酸和丙酮酸:
slide4
生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。生成的丙酮酸可与起终止和显色作用的2,4二硝基苯肼发生加成反应,生成丙酮酸-2,4-二硝基苯腙,进而在碱性环境中生成红棕色的苯腙硝醌化合物,其颜色的深浅在一定范围内与丙酮酸的生成量,亦即与ALT活性的高低成正比关系。据此与同样处理的丙酮酸标准液相比较,便可算出或通过标准曲线查出血清中ALT的活性。
slide6
取干净试管12支,按下表所示标号,要求各S管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测定管,在30min保温期间再做空白管和标准管。取干净试管12支,按下表所示标号,要求各S管和U管进行双管平行操作。先做对照管和测定管,在30min保温期间再做空白管和标准管。
slide7
【实验结果】
  • 1.赖氏法测定ALT的标准曲线(即计量反应曲线) 在坐标纸上以上表中An-A 0之值为纵坐标,相应的酶活性的卡门氏单位为横坐标作图,即得赖氏法测定ALT的标准曲线
  • 2.标本中ALT活性结果
  • ⑴查标准曲线 利用测定所得的吸光度结果(AU-AB),便可从标准曲线上查得标本的ALT结果
  • ⑵计算 将实验测得的AU-AB 、AS 代入下面计算公式,即可算得标本中ALT活性
slide8
【方法评价 】
  • ALT活性测定主要有两类。一是卡门氏(Karman)分光光度法,测定的是酶促反应速率。其原理如下:
  • 由于NADH在波长340nm处有特异吸收峰,因此ALT的活性可通过NADH的减少量,亦即通过340nm吸光度的减少量间接作出定量测定。这一方法特异性、准确性高。但是此法除要加入待测酶ALT的底物外,还需要加入指示酶LDH及其辅酶NADH,又需用紫外分光光度计,因此不易为一般临床化验室推广。
slide9
二是比色测定法,如:金氏法(King法)、穆氏法(Mohun 法)和赖氏法(Reitman-Frankel法)。其原理、试剂、操作步骤及作用温度等完全相同。不同之处在于作用时间:King法60min ,Mohun法和 Reiman法30min。因此它们的单位定义和标准曲线制备也不同。King法单位定义是:每1ml血清在37℃条件下与底物作用60 min,生成1μmol丙酮酸称为一个单位。 Mohun 法单位定义是:每毫升血清在pH=7.4,37℃条件下与底物作用30 min,每生成2.5微克丙酮酸为1单位。赖氏法没有制定自身的单位定义,而是以实验数据套用速率法的卡门氏单位作表示的。1个卡门氏单位的定义是:在温度25℃,pH7.4,波长340nm,光径1cm的条件下,1ml血清使NADH的吸光度下降0.001的转氨酶活性。可见卡门氏单位不是用物质的量浓度,而是用物质的吸光度表示酶的活性单位的。若将卡门氏单位的定义条件代入国际单位计算公式,即得卡门氏单位与国际单位的换算关系:1卡门氏单位=0.4821 IU/L(25℃),便可将卡门氏单位兑换成国际单位。
slide10
改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低浓度)的改良赖氏法,对卡门氏单位的科学套用,使比色法一些缺陷得到了卓有成效的克服,使其结果与速率法较为一致,能较好反映酶的真实活性。改原赖氏法的反应温度(40℃改为37℃)和底物浓度(改为低浓度)的改良赖氏法,对卡门氏单位的科学套用,使比色法一些缺陷得到了卓有成效的克服,使其结果与速率法较为一致,能较好反映酶的真实活性。
  • 由于赖氏法设计的底物浓度,如a-酮戊二酸不足,反应速度只能达到最大速度的65%;显色剂2,4-二硝基苯肼的用量只及反应液中酮酸浓度的一半;保温30min的酶促反应后,新生成的丙酮酸和未用完的a-酮戊二酸存在着无法人为控制的竞争显色的几率问题,如此等等,使赖氏法的重现性较差,在测量精度上仍与连续监测法相差甚大。
slide11
【临床意义】
  • 肝细胞中含ALT最丰富,因此当肝脏疾病致肝细胞受损伤时,ALT即大量释放入血液,致使血清中ALT活性增高。测定ALT是检查肝功能的重要指标之一。ALT显著增高见于各种急性肝炎及药物中毒性肝细胞坏死,中等程度增高见于肝癌、肝硬化、慢性肝炎及心肌梗塞,轻度增高则见于阻塞性黄疸及胆道炎等疾病。骨骼肌损伤、多发性肌炎亦可引起转氨酶活性升高。
  • 【思考题】
  • 1.血清中谷丙转氨酶的测定有何临床意义?
  • 2.血清谷丙转氨酶的测定有何注意点?为什么要避免溶血?