三聚氰胺危害及饲料中残留检测

1. 三聚氰胺危害及饲料中残留检测

2. 一. 三聚氰胺事件回放 • 1. 2007年3月，来源于中国的宠物食品在美国造成宠物死亡，原因为添加三聚氰胺所致。 • 2008年9月, 含三聚氰胺婴幼儿奶粉造成上万婴幼儿肾结石(含量最高达2563ppm)，有死亡病例发生；随后国内外多家奶粉、液态奶及其他奶制品中检测出三聚氰胺。 • 2008年10月，香港检测出国内某知名品牌鸡蛋中三聚氰胺的含量为4.7ppm。 • 2008年10月，辽宁省某处皮毛动物饲料中三聚氰胺残留造成大量皮毛动物死亡，饲料中三聚氰胺残留高达510ppm。 • 5. 目前，食品和饲料中三聚氰胺残留问题及影响仍未消除，任重而道远！

3. 二. 三聚氰胺理化性质 英文名melamine；分 子 式：C3N6H6；分 子 量：126.12；性状为纯白色单斜棱晶体，无味，密度1.573g／cm3 (16℃)。常压熔点354℃（分解）；快速加热升华，升华温度300℃。溶于热水，微溶于冷水，极微溶于热乙醇，不溶于醚、苯和四氯化碳，可溶于甲醇、甲醛、乙酸、热乙二醇、甘油、吡啶等。低毒。在一般情况下较稳定，但在高温下可能会分解放出氰化物。 　　 水溶液呈弱碱性（pKb=8），与盐酸、硫酸、硝酸、乙酸、草酸等都能形成三聚氰胺盐。在中性或微碱性情况下，与甲醛缩合而成各种羟甲基三聚氰胺，但在微酸性中（pH值5.5～6.5）与羟甲基的衍生物进行缩聚反应而生成树脂产物。遇强酸或强碱水溶液水解，胺基逐步被羟基取代，先生成三聚氰酸二酰胺，进一步水解生成三聚氰酸一酰胺，最后生成三聚氰酸。

4. 三. 三聚氰胺理在生活中的应用 三聚氰胺是一种重要的氮杂环有机化工原料，显弱碱性，能够与各种酸反应生成三聚氰胺盐；在强酸或强碱液中，三聚氰胺发生水解，胺基逐步被羟基取代，生成三聚氰酸二酰胺、三聚氰酸一酰胺和三聚氰酸；三聚氰胺与醛类反应生成加成化合物；三聚氰胺与甲醛反应制成树脂，三聚氰胺树脂是一种多种用途的材料，防火耐热且有很高的稳定性，是·一种具有广泛用途的化工原料。 在生活中，三聚氰胺是个多面手。仔细看看家里，墙壁上的装饰材料、平板电视的外壳涂层、厨房里艳丽的塑料碗碟、卫生间里的衣物清洗剂，甚至你口袋里的钞票，都有它的身影。此外，它还被用来制作胶水和阻燃剂，甚至制造化肥。

5. 四. 三聚氰胺应用误区 1. 营养学上说，食品添加剂是指为改善食品品质和色、香、味，以及为防腐和加工工艺的需要，而加入的化学合成的或天然的物质。而从三聚氰胺的理化性质看，三聚氰胺不能增味、保鲜、防腐，也不是天然色素，食用香精，更不能强化营养---它没有任何理由出现在食品中，它根本就不是食品添加剂。 2. 饲料添加剂是指为提高饲料利用率，保证或改善饲料品质，满足饲养动物的营养需要，促进动物生长，保障饲养动物健康而向饲料中添加少量或微量的营养性或非营养性的物质。饲料添加剂应具备的基本条件：（1）对饲养动物有确实的生产和经济效果；（2）对人和动物有充分的安全性；（3）从动物体内排出后，很快分解，对植物及低等生物无毒害，对环境无污染，能符合饲料加工要求。

6. 五. 三聚氰胺危害及毒性研究 1. 1995年，美国纽约里德勒实验室两位毒理学家指出，长期给大鼠、兔和狗喂食大剂量三聚氰胺后，会造成生殖、泌尿系统的损伤，以及膀胱、肾部结石，并可进一步诱发膀胱癌。 2. 国际化学品安全规划署和欧盟委员会1994年合编的《国际化学品安全手册》指出长期或反复大量摄入三聚氰胺，可能对肾与膀胱产生影响，导致结石。 3. 2007-2008年，三聚氰胺先后造成宠物、婴幼儿、皮毛动物严重肾脏损伤和死亡，病理检测结果发现造成的结石细小，但肾脏损伤明显，外观肿大、颜色泛黄、表面有凹凸、个别肾脏甚至出现空洞

7. 六. 三聚氰胺损伤机理 三聚氰胺在体内不能被代谢，需经过肾脏排出。富集在肾脏肾小管中的三聚氰胺浓度升高，形成自身或其他易致结晶的物质析出，刺激肾小管和尿路上皮细胞，引起结晶尿，尿蛋白等。结晶不能排出，造成肾盂病理性扩张，出现肾盂积水。如果不能排出结晶，会引起肾小管堵塞，尿液滞留，引起急性肾功能衰竭。

8. 七. 中国对三聚氰胺残留的控制 1. 2008年10月7日，卫生部等五部门联合发布公告，确定了乳与乳制品中三聚氰胺临时管理限量值，(1)婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的限量值为1ppm，高于1ppm的产品一律不得销售。 (2)液态奶（包括原料乳）、奶粉、其他配方乳粉中三聚氰胺的限量值为2.5ppm，高于2.5ppm的产品一律不得销售。 (2)含乳15%以上的其他食品中三聚氰胺的限量值为2.5ppm，高于2.5ppm的产品一律不得销售。 2. 截止目前，对于饲料加工行业尚无明确的三聚氰胺残留限量规定，暂定为2ppm。但2008年9月，农业部下发通知，要求就饲料质量安全进行专项整治，三聚氰胺是头号目 标 ；另外一个新精神是，以后如在饲料中 检出三聚氰氨，只处罚饲料企业，而不会倒查至原料商。

9. 八. 其他国家对三聚氰胺残留的控制 最近，澳大利亚、新西兰、欧盟、加拿大、香港等国家和地区对食品中三聚氰胺采取了相应的控制措施。澳大利亚和新西兰规定，婴幼儿配方乳粉中三聚氰胺的最高含量不超过1毫克/千克；乳制品和含有乳成分的食品中三聚氰胺的最高含量不超过2.5毫克/千克。欧盟规定从中国进口的乳含量超过15%的所有食品（如巧克力、糖果等）中三聚氰胺的最高含量为2.5毫克/千克。加拿大的规定是婴儿配方乳粉和其他作为唯一营养来源的食品，包括膳食替代食品三聚氰胺最高含量不超过1毫克/千克；其他乳和含有乳成分的食品三聚氰胺最高含量不超过2.5毫克/千克。香港规定了奶类以及供36个月以下婴幼儿和孕妇及哺乳妇女食用的食物中三聚氰胺最高含量为1毫克/千克，其他食物中三聚氰胺的最高含量为2.5毫克/千克。

10. 九. 三聚氰胺残留的检测 目前我国对三聚氰胺检测规定了三种方法，分别是高效液相色谱法（HPLC）、气相色谱-质谱法（GC-MS）和液相色谱-质谱/质谱法（LC-MS/MS），其定量限（精确度）分别为2ppm、0.05ppm和0.01ppm。只要检验样品中三聚氰胺真实含量在检测方法定量限以上，检测方法就能准确检出。企业和监管机构应根据检测对象及临时管理限量值要求，选用与其相适应的检测方法，例如检验婴幼儿配方乳粉时，应选择后两种仪器进行检测。 大连普瑞康生物技术公司生产的用于三聚氰胺检测的酶联免疫试剂盒，平均检测下限可达0.02ppm，可完全满足检测要求

11. 十.高效液相色谱法检测三聚氰胺（HPLC）

12. 十一. 其他检测三聚氰胺方法 1. 2. 3.

13. 十二. 酶联免疫法检测三聚氰胺(ELISA)

14. 十三、酶联免疫法检测三聚氰胺的基本原理 E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E E 酶标记物 底物溶液 对照孔 參考液(不含抗原) 酶标记物 底物溶液 測定孔 樣本(含抗原) 如图所示.在进行测定时首先将包被了抗体的酶标板的微孔分为测定孔和对照孔，在对照孔中加入已知浓度的系列标准品溶液和酶标记物；在测定孔中同时加入酶标记物和待检样本（抗原），酶标记物和样品互相竞争包被抗体的结合点，形成酶标记的抗原—抗体复合物固定在微孔内，没有吸附的酶标记物通过洗涤去除，加入底物溶液于微孔中，复合物上的酶催化底物使其水解、氧化还原成为有色的产物。当测定孔内的样本不含抗原时，固相上的抗体将和酶标记物结合加入底物后呈色较深，当样本含有抗原时，样本中的抗原和酶标记物共同竞争抗体的结合位点，酶标抗原的比例越高，结合在固相抗体上的酶标抗原就越多，酶标抗原的比例越低，结合在固相上的抗体就越少，而在一定的条件下，复合物上酶的量（也反映了固定化的抗原抗体复合物的量）和酶产物呈现的色泽成正比，因此可以用分光光度计进行测定，从而计算出参与反应的抗原和抗体的量，从而进一步得知样本中抗原的多少。这就是竞争法ELISA的原理。

15. 饲料中三聚氰胺快速检测方法操作指引

16. 饲料中三聚氰胺快速检测方法操作指引 • 步骤一：称取1克饲料样品置于15ml的离心管中。 • 步骤二：向离心管中加入10ml提取液，握于手中用力震荡5分钟。 • 步骤三：将离心管放入离心机中，离心10分钟。取上清液待用。 • 步骤四：从铝箔袋中取出所需的微孔条在其中一个微孔中加入100L 三聚氰胺参照标准品溶液。 • 步骤五：在另外的微孔中加入100L 已完成前处理的样品溶液。 • 步骤六：再于每个微孔中另再加入50L 已稀释的酶标标记物。 • 步骤七：轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温避光静置反应50分钟。 • 步骤八：将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。 • 最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。

17. 步骤九：于每一微孔加入底物溶液100L后，轻敲盘子四周，使其充分混合。步骤十：于室温避光静置反应20分钟。步骤十一：加入反应终止液，每一微孔加入100L。步骤十二：将微孔放于酶标仪上进行判读，读取每个微孔的吸光值。结果判读：阴性：样品吸光值的数值高于参照标准品吸光值的数值，即为阴性。阳性：样品吸光值的数值低于参照标准品吸光值的数值，即为阳性。步骤九：于每一微孔加入底物溶液100L后，轻敲盘子四周，使其充分混合。步骤十：于室温避光静置反应20分钟。步骤十一：加入反应终止液，每一微孔加入100L。步骤十二：将微孔放于酶标仪上进行判读，读取每个微孔的吸光值。结果判读：阴性：样品吸光值的数值高于参照标准品吸光值的数值，即为阴性。阳性：样品吸光值的数值低于参照标准品吸光值的数值，即为阳性。

18. 步骤一：称取1克饲料样品置于15ml的离心管中。步骤一：称取1克饲料样品置于15ml的离心管中。

19. 步骤二：向离心管中加入10ml提取液，握于手中用力震荡5分钟。步骤二：向离心管中加入10ml提取液，握于手中用力震荡5分钟。

20. 步骤三：将离心管放入离心机中，离心10分钟。上清液待用步骤三：将离心管放入离心机中，离心10分钟。上清液待用

21. 步骤四：从铝箔袋中取出所需的微孔条在其中一个微孔中加入100L 三聚氰胺参照标准品溶液。

22. 步骤五：在另外的微孔中加入100L 已完成前处理的样品溶液。

23. 步骤六：再于每个微孔中另再加入50L 已稀释的酶标标记物。

24. 步骤七：轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温避光静置反应50分钟。步骤七：轻敲盘子四周，使其充分混合后于室温避光静置反应50分钟。

25. 步骤八：将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。步骤八：将微孔中的反应液甩掉，再将洗液加满每一微孔后甩掉，重复洗3次。最后一次甩掉后，在吸水纸上拍干。

26. 步骤九：于每一微孔加入底物溶液100L后，轻敲盘子四周，使其充分混合。步骤九：于每一微孔加入底物溶液100L后，轻敲盘子四周，使其充分混合。

27. 步骤十：于室温避光静置反应20分钟。

28. 步骤十一：加入反应终止液，每一微孔加入100L。步骤十一：加入反应终止液，每一微孔加入100L。

29. 步骤十二：将微孔放于酶标仪上进行判读，读取每个微孔的吸光值。步骤十二：将微孔放于酶标仪上进行判读，读取每个微孔的吸光值。

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