MYCOPLASMAS CHLAMYDIAS Y RICKETTSIAS

1. MYCOPLASMASCHLAMYDIAS Y RICKETTSIAS Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadas Cátedra de Microbiología General – FACENA – UNNE 2012

2. Bacterias sin pared y Bacterias intracelulares obligadas Objetivo Conocer las principales características biológicas de los Mycoplasmas, Chlamydias y Rickettsias, su capacidad para producir infecciones, las posibilidades diagnósticas y las medidas profilácticas

3. Mycoplasmas - Taxonomía Clase Mollicutes Familia Mycoplasmataceae Géneros Mycoplasma Ureaplasma Especies M. pneumoniae M. hominis U. urealyticum

4. Mycoplasmas - Características generales • No poseen pared celular (Bacterias carentes de pared celular) • Poseen esteroles en su membrana celular • Requerimiento de lípidos complejos preformados (colesterol) • Anaerobios facultativos y algunos anaerobios estrictos • Son pleomórficos (esféricos hasta filamentosos) • Pueden desplazarse por movimiento ameboide en medios líquidos • Pueden existir como saprófitos o producir enfermedades • Genoma pequeño • Resistencia natural a los beta lactámicos

5. FACTORES DE VIRULENCIA • Capacidad de adherirse a los epitelios mediante glicoproteinas: • Proteína P1 (Mycoplasmapneumoniae) • P50 y P100 (Mycoplasmahominis) • Glicopéptido sulfatado • Fosfolipasa (Ureaplasmaurealyticum) • Disminución de la actividad macrofágica • Nucleasas • No se conoce la producción de toxinas • No son invasivos

6. Mycoplasma pneumoniae • El determinante de patogenicidad es la producción de peróxido de hidrógeno que produce la muerte de las células epiteliales por mecanismos desconocidos. • Coloniza las vías respiratorias superiores • Se adhiere a las células de la mucosa respiratoria inferior. • Produce neumonía atípica primaria • Se propaga por contacto directo de hombre a hombre • Afecta a todas las edades y suelen producirse brotes familiares

7. M. pneumoniae - Diagnóstico • Cultivo a partir de secreciones respiratorias: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. • Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA, aglutinación de látex o inmunofluorescencia indirecta • Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico

8. M. hominis y U. urealyticum • Son flora habitual del aparato génitourinario. • Su determinante de patogenicidad es la producción de amoníaco a partir de la urea (U. urealyticum) y de la arginina (M. hominis) • Pueden producir inflamación oportunista tanto en el hombre como en la mujer. • Las manifestaciones son uretritis en el hombre y vaginosis en la mujer por asociación con otras bacterias. • Pueden producir complicaciones en el hombre, la mujer y en el recién nacido.

9. DIFICULTADES DIAGNÓSTICAS • No se colorea al Gram • Necesitan medios especiales (ricos, antibióticos, suero equino) • Método comercial costoso • Medio de cultivo artesanal - Obtención del suero equino • Limitaciones presupuestarias

10. Mycoplasmas urogenitales - Diagnóstico • Cultivo a partir de secreciones genitales: no es muy utilizado pues se necesitan medios especiales, muy enriquecidos y con inhibidores para otras bacterias. • Detección de anticuerpos en el suero del paciente: puede hacerse por ELISA o inmunofluorescencia indirecta. • Los síntomas y los datos epidemiológicos contribuyen mucho al diagnóstico etiológico

13. Chlamydias - Taxonomía • Familia • Chlamydiaceae • Géneros • Chlamydia • Especies • C. psittaci • C. pneumoniae • C. trachomatis • Biovar LGV (linfogranuloma venéreo) • Biovar TRIC (Tracoma-conjuntivitis de inclusión) • Otros (enfermedades genitourinarias)

14. Chlamydias - Características generales • Parásitos intracelulares obligados • Son incapaces de sintetizar ATP • Por mucho tiempo se los consideró virus • Estructura de pared de gramnegativas • Son cocoides e inmóviles • No observables con Gram por su pequeño tamaño • Poseen dos formas biológicas: • Cuerpo elemental (CE): infectivo y no replicante • Cuerpo reticulado (CR): no infectivoy replicante

15. Chlamydias - Ciclo vital

16. Determinantes antigénicos • LPS: Específico de género • MOMP (proteína mayor de la membrana externa): Contiene epítopes específicos de género, especie, subgrupo y serovariedad.

17. Patogenia • C. trachomatis sintetiza proteínas “de stress” que se expresan en la membrana de la célula huésped. La reacción inflamatoria y cicatrizal desencadenada contra estas proteínas explica la obstrucción tubaria en infecciones genitales, y la ceguera en el tracoma.

18. Chlamydias - Patologías

19. Chlamydias - Diagnóstico • MÉTODOS DIRECTOS • Cultivo en líneas celulares • Observación con Lugol y Giemsa (Cuerpos de inclusión) • Detección por Inmunofluorescencia directa o ELISA • Detección por PCR • MÉTODOS INDIRECTOS • Detección de anticuerpos por IFI o ELISA

20. Inmunofluorescencia La sensibilidad y especificidad de la IF con el uso de anticuerpo monoclonales para el MOMP (Mayor Outer Membrane Protein) de C. trachomatis es del 80-90% y 98-99 % respectivamente. La IF tiene mayor sensibilidad que la EIA ya que permite detectar de 10 a 100 cuerpos elementales. Ventajas: • Se independiza del transporte • Se puede utilizar para una gran variedad de muestras • Tiene alta especificidad • Se puede utilizar como método confirmatorio de otros métodos cuando existen discrepancias. Desventajas • Necesita de un microscopio de fluorescencia de gran resolución

21. PCR Las técnicas moleculares (PCR) tienen hasta un 96% de sensibilidad. Detectan en forma directa el ADN bacteriano. Permite detectar 1 cuerpo elemental presente en la muestra Ventajas • Se independiza del transporte • Se pueden utilizar muestras no invasivas (Ej. Orina) • Muy alta sensibilidad y especificidad. Desventajas • Se pueden tener falsos negativos por presencia de inhibidores • Alto costo

22. Rickettsias y Coxiellas - Taxonomía • Familias • Rickettsiaceae Coxiellaceae • Géneros • Rickettsia Coxiella • Ehrlichia • Especies • R. rickettsii C. burnetii • R. prowasekii • R. typhi • E. chaffeensis

23. Rickettsiales - Características generales • Parásitos intracelulares obligados • Son incapaces de sintetizar ATP • Estructura de pared de gramnegativas • Pueden ser cocoides, bacilares o pleomórficas • No observables con Gram por su pequeño tamaño • Habitan en artrópodos hematófagos que actúan como vectores o huéspedes primarios.

24. Rickettsia y Coxiella - Patogenicidad • Estas bacterias infectan eritrocitos, células retículoendoteliales y epitelio vascular. • Penetran a la célula huésped induciendo la endocitosis • Rickettsia abandona el endosoma y se reproduce en el citoplasma mientras que Coxiella se reproduce en el endolisosoma luego de la fusión del endosoma con el lisosoma. • Finalmente la célula del huésped estalla, liberando organismos nuevos. • Además de los efectos de la lisis celular el huésped padece los efectos de la toxicidad de la pared. • Los síntomas aparecerán en función del tejido afectado (epitelio pulmonar, endotelio vascular o monocitos circulantes)

25. Epidemiología

26. Diagnóstico • MÉTODOS DIRECTOS • Cultivo en líneas celulares • Observación con Giemsa (Excepto para Coxiella) • Detección por Inmunofluorescencia directa en las muestras • Detección por PCR • MÉTODOS INDIRECTOS • Detección de anticuerpos por IFI • IgG > 1/128 e IgM > 1/32