slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
实验三 PowerPoint Presentation
Download Presentation
实验三

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 16

实验三 - PowerPoint PPT Presentation


  • 126 Views
  • Uploaded on

实验三. 实验内容 1. 溶血空斑试验( PFC 测定) 2. 酶联免疫吸附试验( ELISA )(示教) 3. 淋转(标本片). 溶血空斑试验( PFC 测定). 实验目的: 1. 掌握 PFC 试验的基本原理及实验 方法; 2. 了解 PFC 试验的临床 意义。. 实验原理. 溶血空斑试验(Hemolytic plaque technique,Plaque—forming cell assay)是检测和计数抗体形成细胞的一种常用方法。

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about '实验三' - yardan


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1
实验三
  • 实验内容

1.溶血空斑试验(PFC测定)

2.酶联免疫吸附试验(ELISA)(示教)

3.淋转(标本片)

slide2
溶血空斑试验(PFC测定)
  • 实验目的:

1.掌握PFC试验的基本原理及实验方法;

2. 了解PFC试验的临床意义。

slide3
实验原理
  • 溶血空斑试验(Hemolytic plaquetechnique,Plaque—forming cell assay)是检测和计数抗体形成细胞的一种常用方法。
  • 原理是将绵羊红细胞(SRBC)免疫过的小鼠脾细胞制成的细胞悬液,与一定量的绵羊红细胞混合,在补体的参与下,使抗体产生细胞周围SRBC溶解,形成一个肉眼可见的空斑或溶血现象。
  • 主要用于检测B细胞的抗体生成能力。
slide4
实验材料
  • 1.小鼠18~22g。
  • 2.5%、15%SRBC。
  • 3.新鲜的豚鼠血清(补体)。
  • 4.Hank's液。
  • 5.解剖器械(剪刀、镊子)、解剖板。
  • 6.无菌空平皿、15目钢网、组织研磨器、注射器、吸管、毛细滴管、试管、微量加样器。
  • 7.玻片小室、酒精灯、石蜡、石蜡锅等。
slide5

5% SRBC免疫小鼠腹腔内注射1.0ml

4d

颈椎脱臼处死小鼠,取脾脏,用Hank’s液漂洗,在无菌平皿中剪碎,200目钢网制成脾细胞悬液

洗涤:1000r/min×10min

去上清,加Hank’s液制成1×107/m1脾细胞悬液

100μl 脾细胞悬液

15%SRBC 200μl

200μl 补体

1mlHank’s液

混匀,灌注小室,37℃放置l小时,观察结果

slide6
实验方法

1.免疫小鼠:5%SRBC lml无菌操作注射于小鼠腹腔。

2. 脾细胞悬液制备:四天后颈椎脱臼处死小鼠,取脾

脏,去脂肪和筋膜,用Hank’s液漂洗,在无菌平皿中剪

碎,用组织研磨器在200目钢网内研磨制成脾细胞悬液。

3.洗涤:取研磨液1ml放于小试管中,加满Hank’s液,混

匀、离心1000rpm10min。

4.弃去上清,加Hank’s液使沉淀的脾细胞恢复1ml体积。

5.混合:取脾细胞 100 微升

15%SRBC 200微升

    补体 200微升

Hank’s液 1毫升

6.灌注小室:混匀后,用尖吸管灌小室,封蜡、标记,放37℃温箱37℃保温30~60min,观察结果

slide7

结果:

  计数空斑总数,并换算出每百万脾细胞中所含抗体形成细胞数。如用于筛选药物,可比较给药组和对照组每1×106个脾细胞中抗体形成细胞(即溶血空斑)数的平均值,以表示并比较药物对机体产生抗体能力的影响程度。

  • 右图显示一个 B 细胞位于空斑中央。  
slide9
【注意事项】  1. 一般选用纯系小鼠。  2.在加入细胞之前,琼脂平板制备时要使琼脂完全溶解,加入脾细胞时应检查是否充分均匀分布,因一时性的冷激会导致形成小的凝胶灶,造成观察和判断困难。  3.注意防止琼脂泡沫的出现。  4 .摘除的脾不宜立即放入冰浴中的液体中,可显著降低空斑计数。 
elisa igg
酶联免疫吸附试验(ELISA)-双位点法检测麻疹病毒IgG抗体(示教)酶联免疫吸附试验(ELISA)-双位点法检测麻疹病毒IgG抗体(示教)
slide11
实验目的
  • 1.掌握酶联免疫吸附试验--双位点法检测麻疹病毒IgG抗体的原理.
  • 2.学习酶联免疫吸附试验--双位点法检测麻疹病毒IgG抗体的实验方法。
slide12
实验原理
  • 酶联免疫吸附实验(ELISA),是目前应用最广泛的免疫酶标记技术包括双抗体夹心法和间接法。
  • 本试验采用麻疹单克隆抗体包被,然后用纯化麻疹抗原结合制成预包被板条,测定人血清中麻疹IgG抗体。IgG抗体测定用于人群抗体水平调查和疫苗效果观察,应进行血清IgG抗体的滴度测定(1:100),对阴性反应者应进行疫苗加强免疫,提高其抗麻疹的免疫水平。
slide13
实验材料
  • 1.待测血清
  • 2.试剂盒;包括抗原包被板(或板条)、阴性对照血清、阳性对照血清、样本稀释液、酶结合物、显色剂A、显色剂B、终止液、洗涤液(30×0.01MPBS)。  
  • 3.毛细管、刻度吸管、小试管等。
slide14

实验方法

1.采血2ml,离心2000rpm 10min

2.样本稀释:取血清用生理盐水稀释1:10, 1:100

3.加样:每孔加2滴样本稀释液,再分别加1:10 1:100 的稀释血清,同时加阳性和阴性对照血清于各自孔中,留一孔作空白对照,放置37℃温箱45min。甩干后用洗涤液洗孔4 次,每次静置片刻,然后在吸水纸上轻轻拍干。

4.加酶( Ab2 ):摇匀每孔加 2 滴酶结合物,空白孔不加, 37 温箱 30min,洗板同上。

slide15

5.显色:每孔先加1滴显色剂A,然后加1滴显色剂B(包括空白孔),37℃温箱10min。每孔加1滴终止液终止反应。肉眼判定不终止。5.显色:每孔先加1滴显色剂A,然后加1滴显色剂B(包括空白孔),37℃温箱10min。每孔加1滴终止液终止反应。肉眼判定不终止。

结果:

1、目测法:与阳性和阴性对照比较,观察颜色深浅作出判断

2、测吸光值(A值):用酶标检测仪测定各孔A值