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石蜡切片的制作及 HE 染色. 实验目的 实验原理 实验用品. 方法与步骤 实验结果 实验报告. 实验目的. 掌握小鼠组织石蜡切片的制作过程 掌握 HE 染色的基本原理和染色方法. 实验原理. 利用光学显微镜对生物样品进行观察，需要样品必需要一定的厚度范围内，才能保证光线的透过性。 由于生物样品多为软性材料，所以必需将其包埋在一定的固体支持物中，常用的支持物有石蜡、火棉胶等。其中石蜡切片是最常用的光镜样品制片技术。
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实验目的 实验原理 实验用品 方法与步骤 实验结果 实验报告
实验目的 • 掌握小鼠组织石蜡切片的制作过程 • 掌握HE染色的基本原理和染色方法
实验原理 • 利用光学显微镜对生物样品进行观察，需要样品必需要一定的厚度范围内，才能保证光线的透过性。 • 由于生物样品多为软性材料，所以必需将其包埋在一定的固体支持物中，常用的支持物有石蜡、火棉胶等。其中石蜡切片是最常用的光镜样品制片技术。 • 苏木素（Hematoxylin）与伊红（Eosin）对比染色法（简称H.E.对染法）是组织切片最常用的方法。这种方法染色广泛，对组织细胞的各种成份都可着色，便于全面观察组织构造，而且适用于各种固定液固定的材料，染色后不易褪色可长期保存。经过HE染色细胞核被苏木素染成蓝紫色，细胞质被伊红染色呈粉红色。
实验用品 • 实验器材：恒温箱、切片机、解剖器械、载玻片、酒精灯、染色缸和烧杯等。 • 实验试剂： Carnoy固定液；二甲苯；各级浓度的酒精溶液；Ehrlich苏木精染液；伊红染液 • 实验材料：小鼠小肠或肝组织
方法与步骤 • 石蜡切片样本的制作 • HE染色
断头处死小鼠，剖开腹腔，取出一部分肝组织，生理盐水冲洗，并将其修切成小块，加入固定液进行固定，各级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。断头处死小鼠，剖开腹腔，取出一部分肝组织，生理盐水冲洗，并将其修切成小块，加入固定液进行固定，各级酒精脱水，二甲苯透明，石蜡包埋。
材料上切片机切片，用蒸馏水将切片贴于干净无油的玻片上，在酒精灯上略烤，使切片展平，将贴好的片子于室温老化3—7天后，即可用于染色。材料上切片机切片，用蒸馏水将切片贴于干净无油的玻片上，在酒精灯上略烤，使切片展平，将贴好的片子于室温老化3—7天后，即可用于染色。
切片到水；染色；蓝化 ；分化；切片再入自来水流水中使其恢复蓝色。低倍镜检查见细胞核呈蓝色、结构清楚；细胞质或结缔组织纤维成分无色为标准。然后入蒸馏水漂洗一次；切片入50%乙醇→70%乙醇→80%乙醇中各3～5 min；复染；放入95%乙醇中洗去多余的红色，入无水乙醇中3～5 min；二甲苯透明，封片，镜检。
染色 • 切片入苏木色精中染色约10～30 min。染色时间应根据染色剂的成熟程度及室温高低，适当缩短或延长。室温高时促进染色，染色时间可短些，否则可适当延长时间，冬季室温低时可放入恒温箱中染色。
蓝化 • 用自来水流水冲洗约15 min。冲洗过程中使切片颜色发蓝。冲洗过程中使切片颜色发蓝（或入碱性水也可，但用促蓝剂对伊红可能拒染，如果时间来得及，应以流水冲洗使切片显示蓝色为宜），但要注意流水不能过大，以防切片脱落，并随时用显微镜检查见颜色变蓝为止。
分化 • 就是将细胞质着的色褪去，使细胞核着色更加鲜明，也称分色。将切片放入1%盐酸酒精液（盐酸1份＋70％乙醇100份）中褪色，见切片变红，颜色较浅时即可，约数秒至数十秒钟。这一步骤是H.E.染色成败的关键，如分化不当会导致染色不匀、或深或浅，得到的切片染色效果差。如果染色适中，可取消此步骤。
复染 • 用0.5%伊红酒精液（伊红0.5 g ＋ 95％乙醇100 ml）对比染色2～5 min。伊红主要染细胞质，着色浓淡应与苏木色精染细胞核的浓淡相配合，如果细胞核染色较浓，细胞质也应浓染，以获得鲜明的对比。反之，如果细胞核染色较浅，细胞质也应淡染。可在伊红酒精液中滴加数滴冰醋酸助染，促使细胞质容易着色，并且经乙醇脱水时不易褪色。
实验报告 • 绘图表示HE染色的染色结果； • 在HE染色中有哪些需要注意的步骤？
