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人参发根 / 不定根诱导及扩大培养

人参发根 / 不定根诱导及扩大培养. 一、原理 发根农杆菌 Ri 质粒上的 T-DNA 整合到人参基因组中， T-DNA 上的 rolA 、 B 、 C 表达诱导发根的形成，其中 rolC 为主要基因。. 二、 试剂与材料 发根农杆菌 A4 、人参、 YEB 培养基、 MS 培养基（实验室缺少试剂 :CaCl 2 .2H 2 O 、 Na 2 MnO 4 .2H 2 O 、 CoCl 2 .6H 2 O 、 HgCl 2 、 VB1 、 VB6 、肌醇、羧苄青霉素）、 解剖刀、恒温恒湿培养箱. 三、 近期任务 1 、农杆菌活化

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人参发根 / 不定根诱导及扩大培养

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Presentation Transcript

  1. 人参发根/不定根诱导及扩大培养

  2. 一、原理 • 发根农杆菌Ri质粒上的T-DNA整合到人参基因组中，T-DNA上的rolA、B、C表达诱导发根的形成，其中rolC为主要基因。

  3. 二、试剂与材料 • 发根农杆菌A4、人参、 • YEB培养基、MS培养基（实验室缺少试剂:CaCl2.2H2O、Na2MnO4.2H2O、CoCl2.6H2O、HgCl2、VB1、VB6、肌醇、羧苄青霉素）、 • 解剖刀、恒温恒湿培养箱

  4. 三、近期任务 • 1、农杆菌活化 • YEB固体培养基划平板，转YEB液体培养基过夜 • 2、外植体发根诱导（剩余人参保存?) • 外植体消毒 切片 植入MS固体培养基（预培养2~3天） 涂抹农杆菌，恒温恒湿培养20~30天 发根除菌 • 发根的液培固培和转接 • 相关文献发根诱导率百分之十几，诱导密度不到2。 • 周期长：2个月左右

  5. 四、扩大培养 • 将诱导产生的发根接种到液体培养基中扩大培养，初步想法是分成三种体系：发根培养体系、不定根培养体系和发根—不定根混合培养体系 • 优势 1）尚未见混合培养报道 • 2）不定根和发根可共用基础MS培养基 • 3）发根长速较快，不定根多糖含量高，两者能否协同生长？（人参、西洋参和甘草的组织培养，甘娟） • 4）不定根和发根所含主要人参皂苷种类相同，如Rg1、Rb1、Rc。（人参、西洋参和甘草的组织培养，甘娟）

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