slide1 n.
Download
Skip this Video
Loading SlideShow in 5 Seconds..
Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους Μη-Î¶Ï…Î¼Ï PowerPoint Presentation
Download Presentation
Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους Μη-ζυμÏ

Loading in 2 Seconds...

play fullscreen
1 / 61

Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους Μη-Î¶Ï…Î¼Ï - PowerPoint PPT Presentation


  • 175 Views
  • Uploaded on

Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους Μη-ζυμωτικά βακτήρια. Ε. Λεμπέση Αν. Διευθύντρια Μικροβιολογικού Εργαστηρίου Ν. Παίδων Αθηνών «Π. & Α. Κυριακού». 7η Ημερίδα Κλινικής Μικροβιολογίας - 2007. Ιδιαιτερότητες μικροβιακής αντοχής των μη ζυμωτικών βακτηρίων.

loader
I am the owner, or an agent authorized to act on behalf of the owner, of the copyrighted work described.
capcha
Download Presentation

PowerPoint Slideshow about 'Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχής και η ερμηνεία τους Μη-ζυμÏ' - wei


An Image/Link below is provided (as is) to download presentation

Download Policy: Content on the Website is provided to you AS IS for your information and personal use and may not be sold / licensed / shared on other websites without getting consent from its author.While downloading, if for some reason you are not able to download a presentation, the publisher may have deleted the file from their server.


- - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - E N D - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - - -
Presentation Transcript
slide1

Κύριοι φαινότυποι μικροβιακής αντοχήςκαι η ερμηνεία τουςΜη-ζυμωτικά βακτήρια

Ε. Λεμπέση

Αν. Διευθύντρια Μικροβιολογικού Εργαστηρίου Ν. Παίδων Αθηνών

«Π. & Α. Κυριακού»

7η Ημερίδα Κλινικής Μικροβιολογίας- 2007

slide3
Ιδιαιτερότητες μικροβιακής αντοχήςτων μη ζυμωτικών βακτηρίων
  • Ενδογενής αντοχή – οφείλεται σε:
    • Μικρή διαπερατότητα της εξωτερικής μεμβράνης (ΕΜ)
    • Συστήματα αντλιών ενεργητικής εκροής
    • Παραγωγή β-λακταμασών τάξης AmpC ή καρβαπενεμασών
  • Επίκτητη αντοχή - προκαλείται από:
    • Σημειακές μεταλλαγές ή/και
    • Απόκτηση εξωγενούς γενετικού υλικού
slide4
Σχετική Διαπερατότητα Εξωτ Μεμβράνηςτων μη ζυμωτικών βακτηρίων
slide5

Βασικοί Τύποι Αντλιών Ενεργητικής Εκροής

Stover et al, 2000

*

P. aeruginosa

*

*

MexAB-OprM: ιδιοσυστασιακή έκφραση

MeXY-OprM, MexCD-OprJ: επαγώγιμη »

MexEF-OprN, MexJK-OprM: σιωπηλή »

slide6
Μη-ζυμωτικά βακτήρια
  • Κλινικά σημαντικά:
    • Pseudomonas aeruginosa
    • Acinetobacter baumannii
    • Stenotrophomonas maltophilia
    • Burkholderia cepacia
p aeruginosa
P.aeruginosa

Ενδογενής αντοχή σε:

  • AMP, AM/CL, α’, β’, γ’ γενιάς κεφ/νες (πλην CAZ), λόγω:
    • Μειωμένης διαπερατότητας της EM

και

    • Παραγωγής β-λακταμασών τάξης AmpC –(χρωμοσωματικές και επαγώγιμες)
  • NAL, TET, CHL, SXT, TIG, λόγω:
    • Αντλίας Ενεργητικής Εκροής (MexAB-OprM)
slide8

Φαινότυπος αντοχής P. aeruginosa(άγριο στέλεχος)

Παραγωγή AmpC

Φαινόμενο Επαγωγής

Μικροβιολογικό Εργαστήριο

Ν. Παίδων “Π.& Α. Κυριακού”

p aeruginosa1
P.aeruginosaΕπίκτητη αντοχή
  • Αφορά:
    • β-λακταμικά
    • Αμινογλυκοσίδες
    • Φθοριοκινολόνες
    • Πολυμυξίνες
  • Οφείλεται σε:
    • Παραγωγή ενζύμων
    • Υπερέκφραση αντλιών ενεργητικής εκροής
    • Τροποποίηση στόχων δράσης των αντιβιοτικών
    • Μειωμένη διαπερατότητα της ΕΜ
p aeruginosa2
Επίκτητη αντοχή της P.aeruginosaστις β-λακτάμες,πλην καρβαπενεμών
  • PSE β-λακταμάσες (AmpA):PSE-1, -4, CARB-3, -4
    • Είναι οι συχνότερες
  • β-λακταμάσες AmpC: Υπερπαραγωγή
  • OXA β-λακταμάσες (AmpD):OXA-10,-13,-19,-28,-31
    • Αρκετά συχνές – μόνο στην P.aeruginosa
    • ΦαινότυποςESBL(μη κλασικός)
  • Εκτεταμένου φάσματος β-λακταμάσες (AmpA)
    • Πιο σπάνιες – ΦαινότυποςESBL
    • TEM-21,-24,-42,-4 και SHV-2a,-12,-5
    • Άλλες: PER-1, VEB-1, GES-1, IBC-1
p aeruginosa3
P. aeruginosa

Παραγωγή PSE-1 (AmpA)

Υπερπαραγωγή AmpC

PIP

PIP

TIC

TCC

CAZ

TIC

TCC

CAZ

R: TIC, PIP S:TCC, CAZ

R: TIC, PIP, TCC, CAZ

slide12

P. aeruginosa

Παραγωγή ESBLs τάξης Α/ SHV-5

Double Disk Synergy Test(+)

Ζώνες αναστολής: CAZ-CAZ/CLAV >4mm

AMC

AZT

CAZ

Μικροβιολογικό Εργαστήριο

Ν. Παίδων “Π.& Α. Κυριακού”

slide14

P. aeruginosa

Παραγωγή ESBL τάξης D /OXA-28

DDST(-)

18th ESCMID Postgraduate Education Course

p aeruginosa4
P. aeruginosaΑντοχήστις καρβαπενέμες

Μη ενζυμικοί μηχανισμοί

  • Απώλεια ή μειωμένη έκφραση πορίνης: OprD
  • Υπερέκφραση αντλίας:MexAB-OprM

Ενζυμικοί μηχανισμοί

  • Yπερπαραγωγή AmpC
  • Παραγωγή β-λακταμασών τάξης A (GES/IBC)
    • R: IMP, λοιπά β-LACT, S/IS: MEM,AZT
  • Παραγωγή μεταλλο-β-λακταμασών τάξης Β
    • IMP, VIM, SPM, GIM
p aeruginosa oprd
P. aeruginosaΑπώλεια ή μειωμένη έκφραση πορίνης OprD

ΜΕΜ:S

ΙΜΡ:R

IP:4mg/L, IPI: 4mg/L

MBL: Negative

Μικροβιολογικό Εργαστήριο

Ν. Παίδων “Π.& Α. Κυριακού”

slide17

P. aeruginosa

Υπερέκφραση αντλίαςενεργητικής εκροής

MEM: R

IMP: S

MBL: Negative

Μικροβιολογικό Εργαστήριο Ν. Παίδων “Π. & Α. Κυριακού”

p aeruginosa amp
P. aeruginosaΜεταλλο-β-λακταμάσες (τάξης AmpΒ)
  • Ταξινομούνται σε 4 τύπους:
    • IMP-1, -2, -4, -7, -9, -10, -11, -13, -16, -18
    • VIM-1, -2, -3, -4, -5, -7, -11
    • SPM-1
    • GIM-1
  • Ευρεία διασπορά - Ελλάδα: VIM-1, -2, -4
  • Υδρολύουν όλα τα β-λακταμικά, πλην ΑΖΤ
  • Κωδικοποιούνται από γονίδια που φέρονται σε συνήθως ιντεγκρόνια τάξης 1
1 imp vim p aeruginosa
Ιντεγκρόνια τάξης 1 με γονιδιακές κασέττες που κωδικοποιούν μεταλλοένζυμα τύπου IMP και VIM σε P. aeruginosa

Clin Microbiol Infect (2002);8:321

p aeruginosa vim
P. aeruginosaΠαραγωγή μεταλλοενζύμου (VIM)

EDTA-Disk synergy test

IMP

MEM

TB

TMP

5μL (0.5M)

EDTA

NT

SUL

CAZ

FOX

AZT

PIP

AMC

AK

TZP

CIP

GN

FEP

18th ESCMID Postgraduate Education Course

Π. Γιακούπη – Εθνική Σχολή Δημόσιας Υγείας

edta disk synergy test
Ανίχνευση μεταλλοενζύμων -καρβαπενεμασών τάξης ΒEDTA – disk synergy test

IMP

EDTA

Lee K. et al, CMI (2001),7,88-102

MBLs(+)

15mm

  • Ενοφθαλμισμός των ΙΜΡRστελεχών σε ΜΗ
  • Τοποθέτηση δίσκων IMP(10μg) και EDTA
  • (500mM-10μL) σε απόσταση 15-20mm
  • Επώαση 18h και
  • Ερμηνεία

IMP

EDTA

MBLs(-)

IMP

EDTA

MBLs(+)

20mm

etest mbl
Ανίχνευση μεταλλοενζύμων -καρβαπενεμασών τάξης ΒEtest - MBL

IMP/EDTA

IMP

MIC ratio of IP/IPI of≥8 or

≥3 log dilutions indicates MBLs

Phantom zone between IP/IPI

indicates MBLs

Deformation of the IP or IPI

ellipse indicates MBLs

www.abbiodisk.com

p aeruginosa5
P. aeruginosaΑντοχή στις αμινογλυκοσίδες

Παραγωγή αμινογλυκοσιδο-τροποποιητικών ενζύμων

  • ACCs
  • ANTs
  • APHs
slide24

T: τομπραμυκίνη, Ν: νετιλμικίνη, Α: αμικασίνη, G: γενταμικίνη, Ι: ισεπαμικίνη

p aeruginosa6
Μη ενζυμικοί μηχανισμοί αντοχής της P.aeruginosa στις αμινογλυκοσίδες
  • Αντλία ενεργητικής αποβολής:MexXY-OprM
    • Χαμηλού επιπέδου αντοχή σε όλες τις ΑΜΓς και σε άλλες τάξεις αντιβιοτικών: β-Lac, FQ, ERY, TET, TIG
  • Μειωμένη είσοδος και συγκέντρωση φαρμάκου μέσα στο κύτταρο
    • Συνήθης μηχανισμός αντοχής σε CF- και ICU-ασθενείς
    • Χαμηλού ή μέτριου επιπέδου αντοχή σε όλες τις ΑΜΓς
  • Τροποποίηση ριβοσωματικού στόχου
    • Ευθύνεται το γονίδιο rmtA που κωδικοποιεί μια 16S rRNA μεθυλάση
    • Προκαλεί υψηλού επιπέδου αντοχή σε όλες τις ΑΜΓς
  • Παραγωγή βιομεμβράνης
slide26
Παραγωγή βιομεμβράνης
  • Ευθύνεται ο γονιδιακός τόπος ndvB, που κωδικοποιεί την παραγωγή γλυκανών στον περιπλασμικό χώρο
  • Οι γλυκάνες δεσμεύουν τις ΑΜΓςεμποδίζοντας την είσοδο τους στο κυτταρόπλασμα
  • Προκαλεί ιδιαίτερη αντοχή στην ΤΟΒ και σε πολλές τάξεις αντιβιοτικών

Science (1998),

280:226-227

p aeruginosa7
P.aeruginosaΑντοχή στις κινολόνες
  • Ενδογενής αντοχή
    • Μειωμένη διαπερατότητα της ΕΜ
    • Αντλία ενεργητικής εκροής: MexAB-OprM
      • Εκφράζεται ιδιοσυστασιακά σε βασικά επίπεδα
      • Αφορά κυρίως το NAL
slide28
Επίκτητη αντοχή στις κινολόνες

Euro Surveillance

Of Antimicrobial

Consumption, ESAC

p aeruginosa fq
P.aeruginosaΕπίκτητη αντοχή στις φθοριοκινολόνες(FQ)
  • Τροποποίηση του στόχου δράσης
    • Σημειακές μεταλλαγές στα γονίδια gyrAκαι parC που κωδικοποιούν τις τοποϊσομεράσες ΙΙ (DNA γυράση)και ΙV
  • Υπερέκφραση Αντλιών Ενεργητικής Εκροής
    • MexAB-OprM: β-Lac, FQ, CHL, NV, TPM, SUL, TG
    • MexCD-OprJ: β-Lac, FQ, CHL, NV, TPM, SUL,TG
    • MexXY-OprM: β-Lac, FQ, AMGs, ERY, TET, TG
    • MexEF-OprN: FQ, CHL, TPM
    • MexVW-OprM: FQ, CHL, ERY, TET
a p aeruginosa colistin
Aντοχή τηςP. aeruginosaστις πολυμυξίνες Β και Ε (colistin)
  • Διασταυρούμενη αντοχή
  • Σπάνια (SENTRY 2001-04: 1.1-2.9%)
  • Yψηλού επιπέδου
  • Οφείλεται σε μεταβολές στη χημική σύνθεση της εξωτερικής μεμβράνης
p aeruginosa9
P. aeruginosa

Μέθοδος διάχυσης των δίσκων

MH άγαρ - 35±20C- 16 έως 18h

Περιβάλλον ατμοσφαιρικού αέρα

CLSIτροποποιημένο

acinetobacter baumannii
Acinetobacter baumanniiΕνδογενής αντοχή

Μειωμένη διαπερατότητα

  • 1-3% της διαπερατότητας της E.coli
  • 2-7 φορές μικρότερη, σε σχέση με την

P. aeruginosa

Παραγωγή β-λακταμασών σε βασικά επίπεδα

  • AmpC: χρωμοσωματικές – μη επαγώγιμες
  • OXA-51/69

Αντλία ενεργητικής αποβολής: AdeABC

  • R: AMGs, CTX, TET, ERY, CHL, TPM, FQs
a baumannii
A. baumanniiΕπίκτητη αντοχή
  • Αντοχή στα β-Lac, πλην καρβαπενεμών
    • Υπερπαραγωγή AmpC β-λακταμασών (ADC-1…-7)
      • Εισδοχή της αλληλουχίας ISAba1στο γονίδιο blaAmpCεπιφέρει υπερπαραγωγή της AmpC και R στην CAZ
    • Παραγωγή άλλων β-λακταμασών τύπου ESBL
      • TEM, SHV, CTX-M, PER-1, VEB-1
slide35

baumannii

  • Παραγωγή ESBL

β-λακταμάση

VEB-1

18th ESCMID Postgraduate Education Course

baumannii
baumanniiΑντοχή στις καρβαπενέμες Μη ενζυμικοί μηχανισμοί
  • Απώλεια ή μειωμένη έκφραση πορινών (CarO) εξωτερικής μεμβράνης
    • Προκαλούν αντοχή κυρίως στην ΙΜΡ
  • Υπερέκφραση αντλίας ενεργητικής εκροής (AdeABC)
    • R: IMP, MEM, CTX, TET, ERY, CHL, TPM, FQs
  • Τροποποίηση των PBPs (σπάνια)
slide38

baumannii

  • Παραγωγή OXA –58 (CHDLs)

MEM

MBL:Negative

IP/IPI:16 / 16mg/L=1

AZT

IMP

Μικροβιολογικό Εργαστήριο Ν. Παίδων “Π. & Α. Κυριακού”

baumannii1
Α. baumanniiΑντοχή στις κινολόνες
  • Σημειακές μεταλλαγές στα γονίδια gyrAκαι parC
    • Χαμηλού ή υψηλού επιπέδου αντοχή
  • Υπερέκφραση Αντλίας ενεργητικής αποβολής: AdeABC (RND-type)
    • Χαμηλού ή μέτριου επιπέδου αντοχή
    • Επί πλέον αντοχή σε: CTX, TET, ERY, CHL, TPM, AMGs
  • Μείωση ή απώλεια πορινών
    • Χαμηλού ή μέτριου επιπέδου αντοχή
baumannii2
Α. baumanniiΑντοχή στις αμινογλυκοσίδες
  • Παραγωγή Αμινογλυκοσιδο-τροποποιητικών ενζύμων
      • ACCs: ακετυλ- τρανσφεράσες
      • ANTs: αδενυλ- ή νουκλεοτιδυλ- τρανσφεράσες
      • APHs: φωσφορυλ- τρανσφεράσες
  • Υπερέκφραση Αντλίας ενεργητικής εκροής: AdeABC
    • Επί πλέον αντοχή σε: CTX, TET, ERY, CHL,TPM, FQs
baumannii colistin
Α. baumanniiΑντοχή στις πολυμυξίνες Β και Ε (colistin)
  • Διασταυρούμενη αντοχή
  • Σπάνια (SENTRY 2001-2004: 1.7-2.7%)
  • Yψηλού επιπέδου
  • Οφείλεται σε μεταβολές στη χημική σύνθεση της εξωτερικής μεμβράνης
acinetobacter baumannii1

CLSI

Acinetobacter baumannii

Μέθοδος διάχυσης των δίσκων

MH άγαρ - 35±20C-ατμ. αέρα -20 έως 24h

stenotrophomonas maltophilia
Stenotrophomonas maltophiliaΕνδογενής Αντοχή

Μειωμένη διαπερατότητα ΕΜ

  • Πτωχή διάχυση β-λακταμικών, πλήν TCC
  • Μειωμένη είσοδοςαμινογλυκοσιδών (AMGs)

Παραγωγή β-λακταμασών

  • L1 – μεταλλοένζυμο (AmpΒ)

R: καρβαπενέμες & άλλα β-Lac, πλην AZT

  • L2 – β-λακταμάση (AmpΑ), τύπου ΤΕΜ

R: κεφαλοσπορίνες & AZT (αναστέλλεται από CLAV)

Αντλία ενεργητικής αποβολής

  • SmeDEF: β-Lac, AMGs, FQs
s maltophilia
S. maltophilia

DDST: AMC+CTX/AZT

TCCS

TCC

TZP

AN

CF

TC

TB

GN

OF

IMP

CP

IMPR

s maltophilia1

CLSI

S. maltophilia

Μέθοδος διάχυσης των δίσκων

MH άγαρ -35±20C -20 έως 24h

Περιβάλλον ατμοσφ. αέρα

MIC: Μέθοδος αραιώσεων

σε ζωμό (CAMHB)ή άγαρ (ΜΗΑ)

35±20C -20 έως 24h

urkholderia cepacia
Βurkholderia cepaciaΑντιμικροβιακή αντοχή

Ενδογενής

  • ΑΜΓς και Πολυμυξίνες
    • Αδυναμία εισόδου από την Ε.Μ.
  • β-λακταμικά
    • Μειωμένη διαπερατότητα (πολύ στενές πορίνες: OpcPO,OpcS)
  • ΤΕΤ, CHL, CIP
    • Αντλία ενεργητικής εκροής (OpcK)

Επίκτητη

  • Αντλία ενεργητικής εκροής: CeoAB-OpcM
    • R: CHL,CIP, TPM
  • Υπερπαραγωγή AmpC και απώλεια πορινών
    • R: β-LACT
b cepacia

CLSI

B. cepacia

Μέθοδος διάχυσης των δίσκων

MH άγαρ -35±20C -20 έως 24h

MIC: Μέθοδος αραιώσεων

σε ζωμό (CAMHB)ή άγαρ (ΜΗΑ)

35±20C -20 έως 24h

slide51
Επιστημονικό Προσωπικό

Φουστούκου Μ

Καλλέργη Κ.

Λεμπέση Ε.

Μάλλιου Κ.

Αντωνάκη Γ.

Ιωαννίδου Σ.

Νινιού Ι.

Παπαδημητρίου Μ.

Παλαιολόγου Ν.

Τεχνολόγοι

Γιαννακουδάκη Κ.

Λέντζου Χ.

Μελισσά Ρ.

Παπαδομανωλάκη Λ.

Πατούνια Α.

Μπορομπόκα Γ.

Τρούπη Ν.

Μικροβιολογικό Εργαστήριο Ν. Παίδων “Π. & Α. Κυριακού”
slide52

Αμινογ/σίδες

β-λακταμικά

Κινολόνες

Ιμιπενέμη

Εξ μεμβράνη

Κυττ μεμβράνη

amp modified hodge test
Ανίχνευση μεταλλοενζύμων -καρβαπενεμασών τάξης AmpΒModified Hodge test

Lee K. et al, CMI (2001),7,88-102

IMP

  • Ενοφθαλμισμός E. coli ATCC25922 σε ΜΗ.
  • Δίσκος ΙΜΡ στο κέντρο.
  • Ενοφθαλμισμός των ΙΜΡRστελεχών Α, Β, C, D
  • Επώαση 18h
  • Ερμηνεία:(Α) και (C) υδρολύουν την ΙΜΡ
  • (Β) και (D) δεν υδρολύουν την ΙΜΡ
slide57

A. baumannii VEB-1/ESBL

P. aeruginosa

PER-1/ESBL

p aeruginosa10
P. aeruginosaΠιθανός μηχανισμός αντοχής στην ιμιπενέμη?

ΜΕΜ:S

ΙΜΡ:R

IP:4mg/L, IPI: 4mg/L

MBL: Negative

Μικροβιολογικό Εργαστήριο

Ν. Παίδων “Π.& Α. Κυριακού”

s maltophilia2
S. maltophilia Επίκτητηαντοχή
  • Οφείλεται σε:
    • Παραγωγή β-λακταμασών
      • ΤΕΜ-
    • Παραγωγή αμινογλυκοσιδο-τροποποιητικών ενζύμων (σπάνια)
      • ACC-
      • ANT-
p aeruginosa11
Ενζυμικοί μηχανισμοί αντοχής της P.aeruginosa στις αμινογλυκοσίδες

Παραγωγή αμινογλυκοσιδο-τροποποιητικών ενζύμων

    • ACCs: ακετυλ- τρανσφεράσες
    • ANTs: αδενυλ- ή νουκλεοτιδυλ- τρανσφεράσες
    • APHs: φωσφορυλ- τρανσφεράσες
  • Ένα στέλεχος μπορεί να παράγει πολλά ένζυμα (2-5)
  • Κωδικοποιούνται από χρωμόσωμα ή από πλασμίδια
  • Τελευταία τα αντίστοιχα γονίδια φέρονται σαν γονιδιακές κασέτες μέσα σε ιντεγκρόνια που κωδικοποιούν μεταλλο-β-λακταμάσες