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丙二酸对琥珀酸脱氢酶 的竞争性抑制作用

生物化学与分子生物学实验室 CQMU 2008. 丙二酸对琥珀酸脱氢酶 的竞争性抑制作用. P 、 97 教师 ： * * *. 一、实验目的. 学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点 学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制 实验的设计思路和方法. 二、实验原理. 酶的竞争性抑制作用. 抑制剂和底物 结构相似 ，可与底物 竞争结合酶的活性中心 ，阻碍酶 - 底物复合物形成. 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力，以及抑制剂与底物浓度的相对比例（ [I]/[S] ）. FAD. HOOC — CH 2 — CH 2 — COOH.

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丙二酸对琥珀酸脱氢酶 的竞争性抑制作用

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Presentation Transcript

  1. 生物化学与分子生物学实验室 CQMU 2008 丙二酸对琥珀酸脱氢酶的竞争性抑制作用 P、97 教师： * * *

  2. 一、实验目的 • 学习掌握酶竞争性抑制的概念和特点 • 学习丙二酸对琥珀酸脱氢酶竞争性抑制 实验的设计思路和方法

  3. 二、实验原理 酶的竞争性抑制作用 抑制剂和底物结构相似，可与底物竞争结合酶的活性中心，阻碍酶-底物复合物形成 抑制程度取决于抑制剂与酶的相对亲和力，以及抑制剂与底物浓度的相对比例（[I]/[S]）

  4. FAD HOOC—CH2—CH2—COOH 甲烯白MBH2 （无色） 丙二酸 HOOC—CH2—COOH 甲烯蓝MB （蓝色） FADH2 琥珀酸脱氢酶 HOOC—CH=CH—COOH 在无氧条件下以甲烯蓝褪色时间判断琥珀酸脱氢酶活性高低，观察竞争性抑制作用

  5. 三、实验步骤 1. 酶提取液的制备 处死大白鼠，分离出肌肉。 制备匀浆液。 ２. 酶促反应及竞争性抑制作用 　 取试管6支，按表所列步骤操作。 　 加液体石蜡以隔绝空气37℃水浴保温 随时观察并记录各管褪色时间！！！

  6. 3. 实验记录和结果分析 酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？ 各管的褪色情况有何区别？为什么？ 丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型及其特点是什么？ 本实验中5号、6号试管的作用是什么？

  7. 四、结果分析 1、酶提取液中有没有琥珀酸脱氢酶活性？ 2、各管的褪色情况有何区别？为什么？ 3、丙二酸对琥珀酸脱氢酶抑制作用的类型 及其特点是什么？如何证明的？ 4、本实验中5号、6号试管的作用是什么？

  8. 五、注意事项 • 加试剂时看清底物与抑制剂的浓度。 • 注意随时观察记录各管褪色时间。 • 37℃水浴保温过程中，不能振摇试管，避免甲烯白重新氧化变蓝。 • 实验结束后一定洗净试管内的液体石蜡。

  9. Let's begin！

  10. 开始！

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