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脂肪酸的 β- 氧化

脂肪酸的 β- 氧化. 一、实验目的. （ 1 ）了解脂肪酸的 β- 氧化。 （ 2 ）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定 β- 氧化的方法及原理。. 二、实验原理. 根据 β- 氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶 A 。两分子乙酰辅酶 A 可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成 β- 羟丁酸。乙酰乙酸、 β- 羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。

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脂肪酸的 β- 氧化

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  1. 脂肪酸的β-氧化

  2. 一、实验目的 • （1）了解脂肪酸的β-氧化。 • （2）通过测定和计算反应液内丁酸氧化生成丙酮的量，掌握测定β-氧化的方法及原理。

  3. 二、实验原理 • 根据β-氧化学说，机体组织能将脂肪酸氧化生成乙酰辅酶A。两分子乙酰辅酶A可再缩合成乙酰乙酸。在肝脏内，乙酰乙酸可脱羧生成丙酮，也可还原生成β-羟丁酸。乙酰乙酸、β-羟丁酸和丙酮总称为酮体。酮体为机体代谢的中间产物。在正常情况下，其产量甚微；患糖尿病或食用高脂肪膳食时，血中酮体含量增高，尿中也能出现酮体。 • 本实验用新鲜肝糜与丁酸保温，生成的丙酮可用碘仿反应测定。在碱性的条件下，丙酮与碘生成碘仿。反应式如下： • 2NaOH+I2→NaIO+NaI+H2O • CH3COCH3+3NaOI→CHI3+CH3COONa+2NaOH • 剩余的碘，可用标准硫代硫酸钠滴定。 • NaIO+NaI+2HCl→I2+2NaCI+H2O I2+2Na2S2O3→Na2S4O6+2NaI • 根据滴定样品与滴定对照所消耗的硫代硫酸钠之差，可以计算由丁酸氧化生成丙酮的量。

  4. 三、仪器、材料和试剂 实验仪器 　 恒温水浴、微量滴定装置、解剖用具、玻璃器皿等。（仪器的选择在实验开始前由学生在预习报告中提出方案后教师审定）。 • 实验试剂1、0.5%（m/V）淀粉溶液 2、0.9%（m/V）NaCl溶液3、0.5mol/L丁酸溶液 4、15%三氯乙酸溶液 5、10%氢氧化钠溶液 6、10%盐酸溶液 • 7、0.1mol/L碘溶液 • 8、标准0.01mol/L硫代硫酸钠溶液 • 9、1/15 mol/L pH7.6mol/L磷酸缓冲液

  5. 四、操作步骤与方法 1、肝糜制备 （1）将家兔颈部放血处死，取出肝脏；用0.9%NaCl溶液洗去污血；用滤纸吸去表面的水分。 （2）称取肝组织5g置研钵中，加少量0.9%NaCl溶液，研磨成细浆。再加0.9%NaCl溶液至总体积10ml，得肝组织糜。

  6. 2、酮体生成和沉淀蛋白质 • 取50ml锥形瓶2只，编号，并按下表操作。

  7. 3、酮体的测定 • 另取50ml锥形瓶2只，编号，并按下表操作。

  8. 混匀后立即用0.01mol/L标准的硫代硫酸钠溶液滴定剩余的碘，滴至浅黄色时，记录滴定A瓶与B瓶溶液所用硫代硫酸钠溶液的毫升数，并按下式计算样品中的丙酮含量。 • 4、计算 • 肝脏的丙酮含量（mmol/g）=（V对照-V样品）×cNa2S2O3÷6 • 式中：V对照为滴定对照所消耗的标准Na2S2O3溶液的体积，以ml为单位； • V样品为滴定对样品消耗的标准Na2S2O3溶液的体积，以ml为单位； • cNa2S2O3为标准Na2S2O3溶液的浓度（mol/L）。

  9. 3.计算 • 按下式计算100ml全血中所含的血糖质量（mg）。 • m＝A1×C0÷A0÷0.1×100 • 式中：m：100ml血中所含的糖质量 • C0：标准葡萄糖溶液浓度 • A1：样品溶液吸光度 • A0：标准溶液吸光度

  10. 五、注意事项 • 1、用新鲜肝糜进行实验，确保肝内酶活力。 • 2、注意滴定终点的控制，保证实验的准确度。

  11. 六、思考题： • 1.为什么说脂肪酸β-氧化实验的关键是制备新鲜的肝糜? • 2.什么叫酮体?为什么正常代谢时产生的酮体量很少?

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