陈玉森 学号： 03088009

1. 陈玉森 学号：03088009

2. 液相色谱法测定茶叶中黄曲霉毒素B1 • 1、 黄曲霉毒素，aflatoxin,简写AFT。 • 一、概述 • 为黄曲霉产毒菌株的代谢产物，属超剧毒物质。 • 尤以AFTB 1 最为重要，毒性最强。

3. 2、 理化性质 • （ 1）溶解性：难溶于水和乙醚、石油醚、已烷等非极性或弱极性溶剂中。易溶于甲醇、氯仿、乙腈等极性溶剂中，溶于苯。 • （ 2）定性：对光、热、酸稳定；对碱和氧化剂不稳定。 • 光：AFTB 1 和AFTG 1 溶液，日光照1d，分解仅40%。得低浓度纯品易为紫外光破坏。故标准品宜用黑纸包裹储存。 • 热：开始分解温度 B 1 ，268～269℃ • 酸：弱酸和中性介质中稳定；强酸和碱性条件下分解。 • pH＜?时分解； • pH=9～10时迅速分解成几乎无毒的盐（内酯键打开）： • 氧化剂：对氧化剂也不稳定，氧化剂浓度越大，分解速度越快：

4. C NaClO (g/L) 破坏AFT所需的时间 • 54.5(g/L) 立即 • 50(g/L) 5s • 40(g/L) 1min • 30(g/L) 2min • 20(g/L) 3min • 10(g/L) 5min • 5(g/L) 30min • 故实践上常可用漂白粉、氯、高锰酸钾、过氧化氢等消毒。

5. 3、 毒性 • （ 1）为已知的100多种霉菌毒素中毒性最大的，属强致癌性物质[有报道说，其毒性比氰化钾更大，约大100倍，比B（a）P大4000倍]，可对动物造成急性中毒，也可引起慢性中毒和致癌、致畸、致突变。它在WHO确定的重点研究毒物中被列为首位。 • 1） 各种 AFT的毒性大小并不相同： • 顺 序 B1 G1 B2 M1 G2 M2 B2a LD 0.36 0.78 1.7 3.2 3.5 12 240 • (50mg/kg ) • 注：对鸭雏，LD50小于50mg/kg即为剧毒物 • 美国研究结论， 1μg/kgAFTB1可使大白鼠致癌；我国研究，20μg/kg可使大白鼠致癌。

6. （2） 与人致癌的关系 • 黄曲霉毒素高污染地区，其肝癌发病率明显较高。如江苏的启东，福建的铜安，广东的汕头，广西的抹援，为我国 4个肝癌高发病地区。

7. （2）污染 调查 • 很广泛，各种粮食中均可检出，核桃、乳及其制品、干辣椒中也有检出。但以花生、玉米、棉籽及其制品污染最为严重，稻谷、高粱其次，“三麦”甚微。 • （ 1）污染特点 • 玉米：胚部污染； • 花生、棉籽：整粒污染但仅限于少数颗粒； • 小麦：皮层污染。

8. （2）污染 调查 • 1976～1978年，粮食部组织，调查了18个粮种，取样19122个，检出7233个，检出率37.7%,其中超标率占49.2%。 • 主要粮种情况（ μ g/kg）： • 玉米，平均 400，最高1000～1200；(所以不要吃玉米) • 花生，平均 200～500，最高50000；(所以不要吃花生) • 花生油，平均 400，最高8000；(所以不要吃花生油) • 稻谷（洞庭湖）平均 50～100，最高330。(所以不要吃稻谷) • 总体分布，广西、福建、江苏污染最严重，山东以北诸省污染少。

9. 5、 限制标准（ ≤ μ g/kg ） • （ 1）GB • 花生、玉米、花生油及其制品， 20； • 大米及其它食用油， 10； • 其它粮食、豆类、发酵食品， 5； • 婴儿代乳品，不得检出。 • （ 2）国外标准（μg/kg） • FAO/WHO，15； • 美国， 25； • 加拿大， 15； • 日本， 10； • 印度， 30； • 以色列、瑞典，不得检出。

10. 1.适用范围 • 本方法适用于出口茶叶中黄曲霉毒素B1含量的检验。 • 2.原理概要 • 样品用三氯甲烷提取，提取液经硅胶柱净化，净化后的提取液用三氟乙酸衍生，用配有荧光检测器的液相色谱仪测定，外标法定量。

11. 3.主要试剂和仪器 • 3.1.主要试剂 • 三氯甲烷； • 正己烷； • 苯； • 甲醇：紫外光谱级； • 乙腈：紫外光谱级； • 三氟乙酸； • 乙腈-水溶液(1＋1)； • 三氯甲烷-甲醇溶液(95＋5)； • 苯-乙腈溶液(98＋2)； • 黄曲霉毒素B1标准品：纯度≥99%； • 黄曲霉毒素B1标准溶液：准确称取适量的黄曲霉毒素B1标准品，以苯-乙腈溶液于棕色容量瓶中，配成浓度为10μg/mL标准贮备液。根据需要，再配成适当浓度的标准工作溶液。

12. 3.2.仪器 • 液相色谱仪，配有荧光检测器； • 硅胶小柱：Waters Sep-pak Silica前处理小柱或相当的硅胶前处理小柱； • 振荡器； • 旋转蒸发器，配有100mL具尾管的圆底烧瓶； • 微量注射器； • 离心管：5mL具塞磨口； • 粉碎机； • 滤膜：有机系用，0.45μm； • 微孔滤膜过滤器：有机系用，0.5μm。

13. 4.试样的抽取与制备 • 4.1.检验批 • 以不超过2000件为一检验批。 • 同一检验批的商品应具有相同的特征，如包装、标记、产地、规格、等级等。 • 4.3.抽样方法 • 从整批产品堆垛的上下不同部位随机抽取2.2规定的件数，逐件开启。分别倒出全部茶叶于塑料布上，用取样铲从每件中各取出有代表性的样品约500g。将所取样品充分混匀，用四分法或分样器逐步缩分出500g，装入洁净密封的样品筒内，加封后，标明标记，及时送实验室。

14. 4.2.抽样数量 • 批量 ，件 最低抽样数，件1～5 1 6～50 2 51～500 11 501～1000 16 1001～1500 19 1501～2000 20

15. 4.4.试样制备 • 将所取回样品全部磨碎，通过20目筛，混匀，均分成两份试样，装入洁净容器内，密封，标明标记。 • 4.5.试样保存 • 将试样于室温下保存。 • 注：在抽样和制样的操作过程中，必须防止样品受到污染或发生残留物含量的变化。

16. 过程简述 • 5.1.提取 • 称取试样5.0g(精确到0.1g)置于100mL具塞锥形烧瓶中，加入15mL三氯甲烷，于振荡器上提取30min，然后经垫有玻璃纤维的漏斗过滤。收集滤液于旋转蒸发器的具尾管圆底烧瓶内，并用三氯甲烷洗涤滤渣，收集滤液至 • 5.2.净化 • 用旋转蒸发器将上述滤液在50℃水浴中浓缩至约1mL，经0.45μm滤膜过滤后，注入硅胶小柱中。用2～4mL正己烷洗涤烧瓶后淋洗小柱，弃去流出液。然后用3～4mL三氯甲烷-甲醇溶液以每秒钟2滴的流速洗脱，收集洗脱液于离心管中。用氮气缓缓吹干，供衍生用。

17. 5.3.衍生 • 5.3.1.试样 • 加200μL正己烷和50μL三氟乙酸于上述离心管中，盖紧磨口塞，超声振荡1min，静置10min，打开磨口塞，缓缓通入氮气至干。用乙腈-水溶液(1＋1)定容至1.0mL，超声1min，用0.5μm滤膜过滤，滤液供液相色谱用。 • 5.3.2.标准工作溶液 • 取1.0mL标准工作溶液，用氮气缓缓吹干，按5.3.1步骤操作。

18. 5.4.测定 • 5.4.1.色谱条件 • 色谱柱：NOVA PAKc18，300mm×3.9mm(内径)； • 流动相：甲醇-水溶液(42＋58)； • 流速：0.8mL/min； • 荧光检测器：激发波长375 nm，发射波长425 nm； • 色谱柱温度：室温。

19. 5.4.2.测定 • 根据样液中黄曲霉毒素B1的含量情况，选定峰高相近的标 • 准工作溶液。标准工作溶液和样液中黄曲霉毒素B1衍生物的响应值均应在仪器检测线性范围内。对标准工作溶液和样液的衍生物溶液等体积参插进样测定。在上述色谱条件下，黄曲霉毒素B1衍生物保留时间约为8min。 • 5.4.3.空白试验 • 除不加试样外，按上述测定步骤进行。

20. 6.结果计算 • 用色谱数据处理机或按下式计算试样中黄曲霉毒素B1的含量： • X＝A·cs/As·c • 式中： • X ——试样中黄曲霉毒素B1的含量，mg/kg； • A ——样液中黄曲霉毒素B1衍生物的峰面积，mm2； • cs ——标准工作溶液中黄曲霉毒素B1的浓度μg/mL； • As ——标准工作溶液中黄曲霉毒素B1衍生物的峰面积，mm2； • c ——最终样液所代表试样的浓度，g/mL。 • 注：计算结果需扣除空白值。

21. 7.低限和回收率测定 • 7.1.低限 • 本方法的测定低限为0.001mg/kg。 • 7.2.回收率 • 回收率的实验数据：黄曲霉毒素B1的添加浓度在0.001～0.5mg/kg范围内，回收率为89.1%～104.9%。

22. 睡着了没大家，我讲完了 • 谢谢大家