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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9 PowerPoint Presentation
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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9

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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9 - PowerPoint PPT Presentation


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第十章 常见植物脱毒与快繁技术 宜职院 08.9. 目的与要求 了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术,根据地方特点和组培技术现状,例举部分植物进行讲授,并结合学生查阅资料共同探讨。 具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术,具备马铃薯、草莓等植脱毒技术,进行微型薯生产基本知能,有利用图书及网络资源收集相关资料,了解相关行业信息的能力,并具备一定交流探讨能力。.

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Presentation Transcript
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目的与要求

了解农作物、果树、花卉、药用植物的脱毒和快繁的生产意义与基本技术,根据地方特点和组培技术现状,例举部分植物进行讲授,并结合学生查阅资料共同探讨。

具有农作物、果树、花卉、药用植物快繁基本技术,具备马铃薯、草莓等植脱毒技术,进行微型薯生产基本知能,有利用图书及网络资源收集相关资料,了解相关行业信息的能力,并具备一定交流探讨能力。

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第一节 农作物的脱毒与快繁 植物组织培养技术已广泛运用于农作物育种和良种繁育,尤其是许多无性繁殖类农作物脱毒及良种快繁,对提高农作物生产的产量和品质发挥了极其重要的作用。
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一、马铃薯的脱毒和快繁(一)茎尖培养脱毒1、取材 生产大田顶芽,或块茎,预培养抽生的枝条污染较少。供试材料存在病毒可结合热处理脱毒。2、消毒 自来水冲洗1h,70%酒精30s,10%漂白粉溶液5~10min,无菌水冲洗2~3次。3、接种 解剖镜下,解剖刀切取0.1~0.3mm带有1~2个叶原基的茎尖,接种到培养基上。4、培养条件 MS、Miller,25±2℃, 1000lx,4周后增至2000~3000 lx,光照16h。5、病毒鉴定 目测法和指示植物鉴定法。

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(二)微型薯生产技术 由试管苗生产的重1~30g的微小马铃薯被称为微型薯。不带病毒,增产效果一般在40%以上。1、试管生产 微型薯一般只有1~5g。用组织培养方法生产微型薯分以下两个步骤:(1)单茎段扩大繁殖(2)微型薯的诱导。2、温室多层架盘工厂化生产 3、低网畦生产

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二、甘薯的脱毒与快繁

(一)茎尖培养

1、茎尖培养脱毒

取高产、优质母株枝条,切成带1芽小段。自来水流水冲洗, 70%酒精10s, 0.1%的升汞10min,无菌水4~5次,或2%次氯酸钠5min,无菌水3~4次。

2、茎尖剥离和培养

解剖镜下剥去芽上较大幼叶,切取0.3~0.5mm含1~2个叶原基的茎尖分生组织,迅速接种到制备好的培养基上。

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3、病毒检测 目测法和指示植物鉴定法。 (二)脱毒苗扩繁和种薯的生产 通过病毒检测的脱毒苗先在试管内进行切段快繁。30d左右长成有6~8片展开叶的试管苗。待试管苗繁殖到一定数量后,即可在防虫条件下于无菌基质中进行栽培繁殖。所结小薯即为原原种薯。以原原种(苗)为种植材料,在防虫条件下的无病毒土壤上培育出的薯块即为原种。以原种苗在大田条件下生产所结薯块即为生产用种薯(良种)。

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第二节 果树脱毒快繁
  • 利用组织培养方法繁殖果树植株具有占地面积小,繁殖周期短,全年都能进行繁殖,繁殖系数高等特点。还可以消除果树的某些病毒病,适应果树向品种更新快、矮化密植以及无病毒栽培方向发展的需要。
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一、草莓

(一)草莓离体快繁技术

1、外植体

6~7月份匍匐茎15~20cm长时取材。

2、培养基

初代MS+6-BA0.5mg/L+GA30.1mg/L+IBA

0.2mg/L

增殖MS+6-BA0.5~1.0mg/L。

3、生根和驯化

1/2MS+IBA0.2~1.0mg/L

根2~3cm时炼苗,一周后发新根,四周后可移栽。

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(二)花药培养脱毒
  • 1、花药培养脱毒技术
  • 春季取单核期花蕾(直径约4mm),4~5℃低温处理24h。浸入70%酒精30s,漂白粉或0.1%氯化汞10~15min。剥取花药放在培养基上。
  • 诱导培养基为MS+6-BA1.0mg/L
  • +NAA0.2 mg/L +IBA0.2 mg/L,
  • 继代培养基为MS+6-BA1.0mg/L+ IBA0.05mg/L
  • 2、脱毒苗的检测
  • 指示植物小叶嫁接鉴定法和电子显微镜鉴定法。
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二、柑橘

1、茎尖微芽嫁接

砧木种子45℃温水浸泡5min—55~56℃热水处理50min—取出吸干—消毒—剥去种皮—种子接种于MS培养基—27±1℃暗培养—2周后萌发芽苗可作砧木。

接穗材料强健新梢 —热空气处理45min (50℃)—取lcm长芽条—消毒处理—切取0.14~0.18mm微茎尖。

砧木苗切去长根和子叶,上胚轴留1~1.5cm切除顶部,垂直于茎,切开一个倒T字形切口,将微茎尖放置于砧木切口内,茎尖底部和砧木切口形成层紧密贴合。

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嫁接苗转植于新鲜培养基上, 27±1℃、16h光照,2~4周后抽生新芽,成活率可达20%~50%。5~8周可移植。

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2、无病毒苗的繁殖

经无病毒苗鉴定后选出无病毒良种苗木,可建立原种母本园。在隔离区,按无病苗的栽培要求建成无病良种母本园,供繁殖无病苗木采穗用。

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三、香蕉

(一)花序轴切片培养

1、花序轴切片

香蕉果穗已完全抽出时采上部末结实花序,无菌下剥取苞片除去子房。取顶端10~15cm长的花序轴段,灭菌后横切成2~3cm厚的薄片,再纵切成数片。

2、培养过程

常用MS培养基,也可用SM或改良MS,继代也可用Knudson培养基。

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(二)影响试管育苗的关键技术 芽的反复增殖是香蕉试管育苗的技术关键。芽的增殖效果如何,较重要的衡量指标是增殖率和代期(—次继代培养的时间),均与生长调节剂关系最为密切。细胞分裂素以6-BA 3~4mg/L为宜,增殖率可达到4以上,代期为3~4周,因而增殖效率高。

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第三节 蔬菜组织培养一、番茄1、花药培养⑴取花药3~7mm长、单核中期的花蕾。⑵将花蕾用0.1‰吐温40溶液浸泡5min—70%酒精15s—3%的漂白粉10 min—无菌水冲洗—接种⑶从花蕾中取出花药,接种在DBMII+2.0mg/L NAA+1.0mg/LKIN的培养基上,27℃、24h光照后黑暗下培养。

2 5 5mm ms 0 2mg liaa 2mg l ba 27 25 2 5 ms 5 10d
2、叶培养⑴取无菌幼嫩叶片,切成5×5mm的小块。⑵MS+0.2mg/LIAA+2mg/L BA 27℃、光。⑶25天后,愈伤组织分化芽。一个月后每切块长出2~5个芽。⑷芽转到无激素的MS培养基上,5~10d后形成根。
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3、胚培养

⑴外植体的制备 授粉后30~40d果实—95%乙醇消毒—5%NaCl中5min—无菌蒸馏水充分淋洗除去种子上的胶状复被。

⑵培养基 MS附加硫胺素3.0um。pH6.0。附加2.4-D9.05um,IiP4.92um和椰乳100ml/L的MS用做愈伤组织启动和保存培养基。

⑶培养条件 愈伤组织启动和保存暗培,27℃。再生生根20~30℃、16h/d,荧光下进行

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二、甘蓝

1、取材和处理

剥去叶球的叶片,留下中心柱和腋芽,—70%酒精1-2分钟—0.2%升汞10-15分钟—剥离腋芽—接种在繁芽培养基上(MS+IAA0.2-0.5mg/L+6BA1.0-3.0mg/L)

2、培养

  光照1000-3000lx, 12-13h/d, 20±2℃,湿度50%-60%。

3、扩大繁殖

重复进行扩繁,直到达到要求繁殖数量为止。

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第四节 观赏植物的组织培养

兰花

兰花系兰科植物,在自然条件下主要靠分株繁殖,繁殖率一年只有几倍,所以无法大量繁殖生产,而且由于长期进行无性繁殖,带病毒株增多,逐渐使种性降低,影响生长。

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1、取材和处理

切取lOcm长生长健壮的茎尖,去苞叶洗净—75%酒精—5%的漂白粉10min—无菌水冲洗—接种。

在兰花叶片组织培养中,应选择带有嫩叶的花梗,以后的处理方法同茎尖。

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2、原球茎的诱导培养

茎尖生长点或叶片接种在原球茎诱导培养基上。因兰花种类而异,可以用固体培养基或液体培养基(液体培养基中应加比较多的蔗糖)。凡原球茎切口处不变褐或变褐物质排出量较少的种类,可用固体培养基,而易变褐的种类,最好用液体培养基,诱导温度应于23℃,光照强度1 500-20001x。

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3、苗的分化培养

兰科植物与其他草本花卉不同,它不易受生长调节物质的影响,一般是将原球茎转入离子浓度较低的培养基中,加入一些如椰子汁等天然提取物质,效果会更好,原球茎很快再生成植株。

lcm高的幼苗转移到壮苗培养基上培养3~6个月,使其长3~4片叶、3~4条根、3~10cm高,可移栽在泥炭和蛭石中,保湿弱光施肥。

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第五节 药用植物离体培养

芦荟

芦荟不能自花授粉结实,因此,用种子繁殖非常困难。目前的繁殖方法主要是分株和分蘖,但难以快速、大量地繁殖种苗,这也是当前芦荟种苗昂贵的重要原因之一。

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(一)材料和培养基 取l0-l5cm高的芦荟幼苗诱导培养基为MS+(1-6mg/ L)BA+(0.1-0.5mg/L)NAA分化培养基为MS+(2-4mg/L)BA+ (0.1-0.5mg/L)NAA生根培养基为MS+(0.1-0.5mg/L)IBA+(2-5mg/L)PP333

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(二)繁殖方法1、愈伤组织培养 茎尖部分—75%乙醇30-60s—升汞5-l0min—无菌水冲洗数次—解剖刀取出组织切块—接种 培养条件:光照 10-12h,1000一2000Lx, (25士)2℃。15-25d后,可膨大成愈伤组织,1周后,就可将愈伤组织转管进行继代培养或分化培养。

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2、继代、分化培养 同诱导3、生根培养 培养条件同分化,半个月后即可生根。4、炼苗 清水喷湿,在15-25℃、湿度60%- 80%的条件下炼苗24h,也可视情况缩短为l2h。5、移栽 将幼苗移栽入由蛭石组成的驯化苗圃中驯化,定期喷施驯化培养液和清水,15-20d后,即可移栽。

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第六节 树木的离体培养

银杏

是园林绿化的珍贵树种,亦有较高的药用价值,以叶及种皮入药,它的叶的制剂能显著扩张脑血管,可治疗脑血栓、冠心病、心肌梗塞及大动脉炎等。种仁、有小毒、性平、有敛肺、定喘等功能。因此可说全身都是宝。但常规繁殖较难,因此组织培养有很大应用价值。

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胚培养

(一)取材:选择生长饱满的银杏种子。

(二)操作:

1、升汞进行表面消毒,无菌条件下剥除外皮和胚乳。接种在MS  培养基上。培养条件:光照1500 LX ,温度25度。

2、愈伤组织的诱导:1/2MS+IBA浓度梯度(1、3、5、7、10PPM)诱导愈伤组织。将培养3天后的银杏胚接种在此培养基上,诱导出大量的愈伤组织。

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3、愈伤组织继代培养:

MS+1.0mg/LNAA+0.1mg/LKT,24—26℃,24h光照培养。20天继代一次。

4、生根培养:

1/2MS+0.2-0.5mg/lNAA

目前有人用根太阳(生根剂)0.5PPm+1/2MS培养基

(三)扩大繁殖和炼苗移栽   按常规方法即可

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思考

1、说明马铃薯微型薯的生产技术

2、查阅资料,了解我国脱毒种苗生产现状

3、查阅资料,了解我国兰花组培生产特点

4、查阅资料,了解我国药用植物组培技术情况

5、查阅资料,了解我国林木组培生产状况