禽流感的检测方法

1. 禽流感的检测方法 生物技术092班 制作人：柳加礼 小组成员：柯佳慧 郑梦昀

2. 禽流感的概念 禽流感的传播途径 禽流感的检测方法 禽流感的预防

3. 禽流感 禽流感是禽流行性感冒的简称。是由A型禽流行性感冒病毒引起的一种禽类（家禽和野禽）传染病。禽流感病毒感染后可以表现为轻度的呼吸道症状、消化道症状，死亡率较低；或表现为较严重的全身性、出血性、败血性症状，死亡率较高。这种症状上的不同，主要是由禽流感的毒型决定的。

5. 禽流感的传播途径 禽流感的传播有病禽和健康禽直接接触和病毒污染物间接接触两种。禽流感病毒存在于病禽和感染禽的消化道、呼吸道和禽体脏器组织中。因此病毒可存在眼、鼻、口腔分泌物及粪便排出体外，含禽病毒的分泌物、粪便、死禽尸体污染的任何物体。健康禽通过呼吸道和消化道感染，引起发病。

7. 无菌采集病料经处理后接种9～11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性，若为阴性则应继续盲传2－3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫（ND）抗血清做血凝抑制（HI）试验，以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异性核心抗原——核糖蛋白（NP）或基质蛋白（MP），再用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。无菌采集病料经处理后接种9～11日龄鸡胚，收取尿囊液测定血凝活性，若为阴性则应继续盲传2－3代。对具有血凝活性的尿囊液需先用新城疫（ND）抗血清做血凝抑制（HI）试验，以排除ND感染。然后用免疫扩散等方法来检测特异性核心抗原——核糖蛋白（NP）或基质蛋白（MP），再用血凝抑制试验和神经氨酸酶抑制试验鉴定A型流感病毒亚型。

8. 由于流感病毒为正粘病毒，属于形态特征性强的病毒，因而可用电镜技术来诊断，为提高禽流感的检出率，除样品制备技术外，取病料的部位和时间也是获得准确检验结果的关键。病料的采集部位及取材时间应根据禽流感病毒在动物体内的分布特征及其感染特性而定。由于流感病毒为正粘病毒，属于形态特征性强的病毒，因而可用电镜技术来诊断，为提高禽流感的检出率，除样品制备技术外，取病料的部位和时间也是获得准确检验结果的关键。病料的采集部位及取材时间应根据禽流感病毒在动物体内的分布特征及其感染特性而定。

9. 利用抗原与抗体在体外或体内均能发生特异性结合的特性设计的检测抗原或抗体的一系列检测技术，均称为免疫学检测技术。由于在体外进行反应时，一般采用含有抗体的血清进行试验，故称为血清学技术，它具有特异性强，敏感性高，适应面广，方法简便快速，制样简单等特点。利用抗原与抗体在体外或体内均能发生特异性结合的特性设计的检测抗原或抗体的一系列检测技术，均称为免疫学检测技术。由于在体外进行反应时，一般采用含有抗体的血清进行试验，故称为血清学技术，它具有特异性强，敏感性高，适应面广，方法简便快速，制样简单等特点。

10. 1.血凝（HA）与血凝抑制（HI）试验 AIV的囊膜表面具有血凝素（HA）能凝集多种动物的红细胞，这种凝集特性能被特异的血清抑制。HA试验主要用于AIV的常规检测，HI试验可用于AIV的鉴定和血清中AIV抗体浓度的测定。

11. 2.琼脂扩散试验（AGP）： 琼脂凝胶的孔径约85nm，允许抗原抗体在凝胶中自由扩散，形成浓度梯度，当抗原抗体在比例适当处相遇，形成抗原抗体复合物后在凝胶中不能再扩散，从而形成肉眼可见的沉淀线。通常用于检测抗A型流感病毒核蛋白（NP）和基质蛋白（MP）抗体。

12. 3.免疫荧光(IF)技术： • 荧光色素（常用异硫氰酸荧光素）与抗体分子结合后，并不影响抗体蛋白分子的免疫活性，可与标本中特异性抗原特异性结合，且这种结合较为牢固，用缓冲液洗涤时除去游离的荧光素标记抗体后，用荧光显微镜观察。此技术最早用于鉴定和定位流感病毒感染细胞中特异性的抗原，主要是NP或MP抗原。检测NP抗原主要出现核内荧光，检测MP抗原主要出现胞浆荧光，核内也有部分荧光。

13. 4.酶联免疫吸附试验（ELISA）： • 抗原和抗体能与固相载体表面结合并能保持其免疫活性，抗原或抗体与酶结合后的标记物既能保持抗原或抗体的免疫活性，又能保持酶的活性，受检物中的抗原或抗体与固相表面的抗体或抗原发生免疫反应并结合在固相表面，此抗原抗体复合物又能结合相应的酶标记物，洗涤除去未结合的酶标记物，加入酶反应的底物，底物被酶催化为有色产物，显色的程度与受检物的抗原或抗体的含量直接相关，可根据显色的深浅进行定性和定量测定。

14. 1.聚合酶链式反应（PCR）及反转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）：1.聚合酶链式反应（PCR）及反转录—聚合酶链式反应（RT-PCR）： 是一种在体外由引物介导的DNA序列酶促合成反应，在体外扩增核酸序列。主要是利用DNA聚合酶依赖于DNA模板的特性模仿体内的复制过程，在附加的一对引物之间诱发聚合反应，对于RNA病毒，必须用反转录酶将RNA反转录成cDNA拷贝，然后再用PCR进行扩增，该技术称为RT-PCR。用RT-PCR核蛋白反转录引物来鉴定AIV，用H5和H7亚型AIV的特定引物进行AIV分型鉴定。

15. 2.荧光RT-PCR： 荧光RT-PCR是将荧光素标记的探针与引物一起在荧光PCR仪中反应，电脑对整个反应进行实时监测。AI荧光RT-PCR检测试剂盒系列包括AIV通用型及H5、H7、H9亚型AIV检测试剂盒。与普通RT-PCR比较，在以下几个方面有非常明显的优势。快速，灵敏，特异。

16. 3.基因核苷酸序列扩增法： 是以转录为基础的扩增系统，用来检测RNA病毒，可以在一种混合物和一个温度下进行连续的扩增。具有如下优点，快速，灵敏，高特异性，无交叉污染。

18. 谢谢！